利用分析试剂盒定量分析蛋白聚集体

Wayne F. Patton, Ph.D.

Keywords: 聚集、生物工艺、蛋白疗法、生物治疗

蛋白聚集严重影响以蛋白为基础研发的药物。在药物制剂中，蛋白聚集在生物活性和免疫原性方面影响药效。

蛋白聚集发生在生产过程的各个阶段包括细胞培养、纯化、生产、储存、运输等方面。制药工业希望在生物工艺中找到新的方法，可用于检测、追踪、定量分析影响蛋白聚集的因素。

近年来以冻干稳定形式存在的蛋白聚集体作为标准品，可以准确地定量检测蛋白聚集，加上新颖的只需在酶标仪里即可实验的ProteoStat? protein aggregation assay，可对蛋白检测方法进行优化。

在这篇文章中，使用已知浓度的聚集IgG标准品作为标准曲线，通过ProteoStat? protein aggregation assay/standards对IgG的聚集水平进行检测，集中分析了制药工业中常见的3种聚集形式。

热诱导聚集

机械诱导聚集

冷冻和反复冻融诱导聚集

在相同情况下，ProtesStat染料的荧光强度比Thioflavin T染料高100倍。对于浓度为1.2 ug/ml的聚集体，ProteoStat染料的信噪比为12.8，而Thioflavin T染料的信噪比仅为1.2，表明ProteoStat染料在蛋白聚集检测中更准确、灵敏度更高。

正因为由此显著的优势，ProteoStat protein aggregation assay和ProteoStat protein aggregation standards通常能够共同用于各种常规形式的蛋白聚集检测。

材料和方法

Enzo Life Sciences 推出了ProteoStat protein aggregation assay 和ProteoStat protein aggregation standards，利用荧光分子信号染料可特异性结合聚集蛋白和多肽，在微孔板中即可检测。

探针在溶液中是不发出荧光的，当与聚集蛋白的四级结构结合时会发出明亮的荧光。一旦聚集标准品发生重组，它们将含有0-12.5%的聚集蛋白，总蛋白浓度维持在1mg/ml。