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用于噬菌体cDNA文库展示的载体
点击次数：167 发布时间：2016/8/2 13:14:16
因为全长cDNA包括在3’末端的翻译终止子，原核表达时缺乏合适的核糖体结合位点（如果这些cDNA来源于真核细胞），确保cDNA在噬菌体表达的最实际的方法是将5’末端与载体基因融合。传统上，噬菌体展示是与衣壳蛋白pⅢ或pⅧ的N末端融合，并且普遍认为直接与任一个衣壳蛋白的C末端融合都与噬菌体装配不相容。因此，围绕这些限制条件设计了三个专门的载体：一个策略是把pⅢ与c-Jun的亮氨酸拉链融合，而翻译的cDNA产物与c-Fos（pJufo）的亮氨酸拉链的C末端融合。噬菌体装配时，拉链结合在噬菌体的末梢，因此壳体包裹的eDNA与它编码的产物相连。第二个策略是直接相互获取法（Direct Interaction Rescue），利用小衣壳蛋白pⅢ的功能模块性：eDNA通过与pⅢ的感染性结构域的C末端融合来表达，而蛋白探针放在pⅢ的C末端部分，包埋在噬菌体的核心。只有那些能在探针和特异的eDNA编码产物之间建立稳定相互作用的噬菌体才能恢复它们的感染性，同时用来在大肠杆菌中扩增。第三个策略（在本章将详细描述）是围绕pⅢ并基于一个结论，这个结论是小衣壳蛋白pⅥ的C末端表达在表面，因此一个富含甘氨酸的六肽基因Ⅵ（gⅥ）-cDNA的融合基因可以在噬菌体表面显示。蛋白Ⅵ（pⅥ）通过在pⅢ和噬菌体核心之间提供链接来稳定噬菌体的结构。这三个系统在蛋白配体和（或）多克隆抗血清选择文库中的eDNA克隆相互作用上被证明是成功的。最近一团体出人意料地报道了通过优化联接序列（8～10个氨基酸）与pⅢ或pⅧ的C末端融合，多肽能在丝状噬菌体表面被功能性地展示出来。理论上，这个惊人的功能融合应该在eDNA克隆基因表达上起着很重要的作用，但是理论上的证据仍然需要证明。
