菌种保藏注意事项

菌种保藏要获得较好的效果，需注意以下三个方面。

(1)菌种在保藏前所处的状态绝大多数微生物的菌种均应保藏其休眠体，如孢子或芽胞。保藏用的孢子或芽胞等宜采用新鲜斜面上生长丰满的培养物。菌种斜面的培养时间和培养温度影响其保藏质量。培养时间过短，保存时容易死亡；培养时间长，生产性能衰退。一般以稍低于最适生长温度下培养至孢子成熟的菌种进行保存，效果较好。

(2)菌种保藏所用的基质斜面低温保藏所用的培养基，碳源比例应少些，营养成分贫乏些较好，否则易产生酸，或使代谢活动增强，影响保藏时间。砂土管保藏需将砂和土充分洗净，以防其中含有过多的有机物影响菌的代谢或经灭菌后产生一些有毒的物质。冷冻干燥所用的保护剂，有不少经过加热就会分解或变性的物质，如还原糖和脱脂乳。过度加热往往形成有毒物质，灭菌时应特别注意。

(3)操作过程对细胞结构的损害冷冻干燥时，冻结速度缓慢易导致细胞内形成较大的冰晶，对细胞结构造成机械损伤。真空干燥程度也将影响细胞结构，加入保护剂就是为了尽量减轻冷冻干燥所引起的对细胞结构的破坏。细胞结构的损伤不仅使菌种保藏的死亡率增加，而且容易导致菌种变异，造成菌种性能衰退。

1.菌种保藏机构

菌种作为一种重要的生物资源，国际上许多国家都设立了专门的菌种保藏机构。菌种保藏机构的任务是广泛收集各种微生物菌种，并把它们妥善保藏，使之达到不死、不衰、不乱和便于交换使用的目的。国际上很多国家都设立了菌种保藏机构。例如：中国微生物菌种保藏管理委员会(CCCCM)，美国标准菌种保藏中心(ATCC)，美国的北部地区研究实验室(NRRL)，英国的国家典型菌种保藏所(NCTC)，日本的大阪发酵研究所(IFO)，东京大学应用微生物研究所(IAM)，荷兰的真菌中心收藏所(CBS)，法国的里昂巴斯德研究所(IPL)，德国的科赫研究所(RKI)等。细胞

中国微生物菌种保藏管理委员会成立于1979年，其任务是促进我国微生物菌种保藏的合作、协调与发展，以便更好地利用微生物资源，为我国的经济建设、科学研究和教育事业服务。该委员会下设六个菌种保藏管理中心，其负责单位、代号和保藏菌种的性质如下。普通微生物菌种保藏管理中心(CCGMC)：中科院微生物所，北京(AS)，真菌、细菌；中科院武汉病毒研究所，武汉(AS—IV)，病毒。

美国ATCC(American Typeculture collection)目前采用冷冻干燥保藏法和液氮保藏法两种最有效的菌种保藏方法．以达到最大限度减少传代次数，避免菌种退化，见图7．5。当菌种保藏机构收到合适菌种时，先将原种制成若干液氮保藏管作为保藏菌种，再制成一批冷冻干燥管作为分发用。经5年后，假定第一代(原种)的冷冻干燥保藏菌种已分发完毕，就再打开一瓶液氮保藏原种制成一批冷冻干燥管作为分发用。这样，至少在20年内，用户获得的菌种，至多只是原种的第二代，这样可以保证所保藏的分发菌种的原有性状。细胞

原创作者：上海研生实业有限公司