细胞计数的方法

细胞计数(cell counting)是细胞培养中常用的一项基本技术，是用来计数细胞悬液中活细胞数量的一种方法，也是检测培养细胞增殖状态的一个重要手段。一般利用血细胞计数板进行。

一、材料

1．细胞培养物(悬浮培养或贴壁培养均可)。

2．血细胞计数板，盖玻片，玻璃吸管，显微镜。

3．O．25％胰蛋白酶溶液。

二、方法

(一)准备计数板

以酒精清洁计数板和盖玻片后，用丝绸布轻轻拭干。

(二)制备细胞悬液

悬浮培养的细胞可直接进行细胞计数。贴壁生长的细胞需首先将培养物制成细胞悬液，其基本步骤如下：

1．终止培养，将培养物吸出，用PBS洗培养物一次。

2．向培养瓶内加入1ml O．25％胰蛋白酶溶液，37℃消化3～5min。期间不断在镜下观察。当细胞变圆接近脱壁时，弃消化终止消化。

3．加入一定量的细胞培养液或PBs，用吸管吹打至细胞脱壁，制成细胞悬液。

(三)加样

用玻璃毛吸管吸取少许细胞悬液，从盖玻片上或下侧的计数板凹槽处加入微量的细胞悬液．至盖玻片下被液体充满为止。加样量不宜过少，控制至不溢出盖玻片为宜，加样时勿带人气泡。

(四)计数

在显微镜低倍镜(10×物镜)下计数四角大方格中的细胞数。细胞压中线时，只计左侧和上方者，不计右侧和下方者。成团细胞按单个细胞计数。

(五)计算

按下列公式可计算出细胞悬液中的细胞密度。

细胞数／ml=(4大格细胞数之和／4)×10 4

三、注意事项

1．细胞悬液制备时，务求胰蛋白酶消化充分，得到分散良好的单个细胞悬液。否则将影响细胞计数结果。

2．取样计数前充分混匀细胞悬液，特别是在连续取样计数时尤应注意。

3．如显微镜下遇较多细胞团(10％以上)，说明消化不充分；但若细胞数过少(少于200个／10mm2)或过多(多于500个／10mm2)，说明稀释不当，前者需将细胞悬液离心后重悬于少量培养液中，后者需适当加大稀释倍数。

细胞计数除用上述方法外，目前还有新型的自动计数仪，可供大规模细胞计数工作使用。各种型号的计数操作不尽相同．可根据使用说明进行操作。

原创作者：上海研生实业有限公司