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微量培养法测定TCID50
点击次数：254 发布时间：2016/1/4 14:43:12
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黄*
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测定病毒感染性强弱常采用50％组织细胞感染量(TCID50)和蚀斑形成试验(PFU)测定。50％组织细胞感染量(50%tissue culture infection dose，TCID50)是指能使半数单层细胞管(孔)出现细胞病变的病毒稀释度。此法只能估计病毒感染性的强弱和含量，不能准确测定感染性病毒颗粒的多少。
(一)材料
1．待测病毒液单纯疱疹病毒一1型(HSV一1)。
2．细胞培养成层Vero细胞一瓶。
3．含2％FCS的MEM或RPMI1640维持液及Hank’S液。
4．无菌的96孔细胞培养板及微量移液器、吸管、试管等。
(二)方法
1．选择培养经24～48h生长旺盛、成层良好的Vero细胞一瓶，倾弃生长液，加入0．02％EDTA 10ml，37℃消化10～15min后，弃去消化液，用含10％FCS的MEM或RP—MI1640生长液分散细胞，使细胞悬液浓度为4×105／ml。用微量移液器将细胞悬液加入无菌微孔培养板中，每孔 O．1ml。
2．将培养板置于5％CO2孵箱中37℃培养12～18h，使细胞生长成单层。
3．将待测病毒液在试管内用2％Fcs的MEM或RPMll640维持液作lO倍系列稀释，使病毒液浓度分别为10-1、10 -2、10-3……10-8。
4．弃去培养板中生长液，各孔细胞用Hank’s液洗涤2次，每孔加入不同稀释度的病毒液0．1ml，每个稀释度4个孔。4个对照孔加入维持液0．1ml，37℃吸附1h，然后各孔再加入维持液0．1ml，轻轻摇匀，37℃ 5%CO2静止培养。逐日观察各孔细胞病变，连续观察4天。
(一)材料
1．待测病毒液单纯疱疹病毒一1型(HSV一1)。
2．细胞培养成层Vero细胞一瓶。
3．含2％FCS的MEM或RPMI1640维持液及Hank’S液。
4．无菌的96孔细胞培养板及微量移液器、吸管、试管等。
(二)方法
1．选择培养经24～48h生长旺盛、成层良好的Vero细胞一瓶，倾弃生长液，加入0．02％EDTA 10ml，37℃消化10～15min后，弃去消化液，用含10％FCS的MEM或RP—MI1640生长液分散细胞，使细胞悬液浓度为4×105／ml。用微量移液器将细胞悬液加入无菌微孔培养板中，每孔 O．1ml。
2．将培养板置于5％CO2孵箱中37℃培养12～18h，使细胞生长成单层。
3．将待测病毒液在试管内用2％Fcs的MEM或RPMll640维持液作lO倍系列稀释，使病毒液浓度分别为10-1、10 -2、10-3……10-8。
4．弃去培养板中生长液，各孔细胞用Hank’s液洗涤2次，每孔加入不同稀释度的病毒液0．1ml，每个稀释度4个孔。4个对照孔加入维持液0．1ml，37℃吸附1h，然后各孔再加入维持液0．1ml，轻轻摇匀，37℃ 5%CO2静止培养。逐日观察各孔细胞病变，连续观察4天。
原创作者：上海研生实业有限公司
