进口ELISA试剂盒的定量测定

我们仍有必要确认一下是否会产生交叉反应的问题。在用双抗夹心法进行进口elisa试剂盒检测时，检测用的二抗必须特异性针对检测一抗，而不能与捕获抗体起反应。如果检测用二抗与捕获抗体结合，实验特异性就会大打折扣。通常我们选用源自不同宿主的捕获抗体和检测一抗，来避免上述问题。与此同时，了解试剂盒中提供的buffer也是有必要的（例如washing buffer和blocking buffer），以免这些buffer含有可能影响抗原抗体相互作用的组分，使检测结果收到影响。 如今检测ELISA有许多途径，我们可以根据自己的偏好进行选择。一般进口ELISA试剂盒检测的是酶促反应的可溶性产物，抗体上结合有相应的酶（例如通常使用的辣根过氧化物酶HRP），而反应体系中添加有相应的底物（如3，3-二氨基联苯胺DAB）。
这种酶促反应生成具有特征性的颜色，可以通过分光光度计进行检测，碱性磷酸酶AP也是一种常用酶。酶可以结合在一抗上，也可以结合在二抗上，还可以使用链霉亲和素标记的酶与亲和素标记的一抗结合。此外进口ELISA试剂盒的结果检测还包括放射性检测、荧光检测、化学发光或显色法检测等。目前国内在临床上应用的 ELISA试剂盒绝大部份是用于传染性病原体的抗原或抗体的定性测定，也有少部份用于αFP、hCG、细胞因子等。
进口ELISA试剂盒定性测定的“阳性”和“阳性”的判定依据是试剂盒所确定的阳性判定值（Cut-off）。定量测定的“量值”依据是试剂盒中所带标准品同时测定得出的剂量反应曲线（又称标准曲线）。有关ELISA定性和定量测定结果的数据处理后面将有专门章节讨论。本处只想强调的一点是，进口ELISA试剂盒定性测定的“阴性”和“阳性”结果的判定依据只能是试剂盒本身所确定的Cut-off值，而不能以卫生部临床检验中心供应弱阳性定值质控血清。为什么要强调这一点呢？主要是因为以前有很多基层实验室均使用卫生部临床检验中心供应的弱阳性定值质控血清（以前也称“临界值”血清）的测定吸光度来判定结果，高于其判为阳性，反之为阴性，而不管试剂盒Cut- off值为何。到目前为止，仍有一些实验室在坚持这种错误的做法。进口ELISA试剂盒的Cut-off值的设立是建立在一系列科学试验及统计学研究的基础上的（详见后述），而卫生部临床检验中心供应的弱阳性定值质控血清主要是供临床实验室进行室内质控时使用。

原创作者：上海基免科研试剂网