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ELISA试剂盒的准备工作及注意事项

点击次数:184 发布时间:2015/5/25 9:20:07
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李*
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因为elisa试剂盒测定中单个空缺孔的非特异吸收上有一定程度的不确定性,也就是说每次测定或同次测定空缺孔位置的不同均有可能得到不同吸光度测定值,所以在ELISA测定比色时,最好是使用双波长比色。因此,双波长比色测定具有能排除由微滴板本身、板孔内标本的非特异吸收、指纹、刮痕、灰尘等对特异显色测定吸光度的影响的长处。比色结果的表达以往通用光密度(oplical density,OD),现按划定用吸光度(absorbence,A),两者含义相同。
所谓的单波长比色等于通常的以对显色具有最大吸收的波长如450nm或492nm进行比色测定;而双波长双色则酶标仪在敏感波长如450nm和非敏感波长630nm下各测定一次,敏感波上下的吸光度测定值为样本测定酶反应特异显色的吸光度与板孔上指纹、刮痕、灰尘等脏物所致的吸光度之和;非敏感波长下测定即改变波长至一定值,使得样本测定酶反应特异显色的吸光度值为零,此时测得的吸光度即为脏物的吸光度值。选择试剂:
选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
标本收集与保存:
避免使用肉眼可见的溶血标本、高脂标本和混浊标本;2-8℃下,标本可放置24-48小时,ELISA试剂盒长期保存需放置-20℃下。
请避免反复冻融。
具体请参照:
试剂使用中:
试剂盒中会有提示,一般需要准备的有:
洗涤液;用前配制;有的试剂盒会标明,配好的4度下一般可以放一个月;如果没有标明,尽量用新鲜的,不要多配制。
显色液(有A液和B液的),用前15分钟配制;
标准品:有的试剂盒中标准品是已经配制好的,4度保存;有的是要现配制的;按照说明书操作;
浓缩生物素结合的二抗和HRP:如果需要配制,试剂盒没注明配好可以保存多久的话,尽量现配现用(用前15分钟配制);
原则是:试剂盒上没有指出配制物的储藏方式的话,应该现配现用;不要怕麻烦;还有小瓶的管子开盖前要离心,以免盖子上粘连以后总量不够。
ELISA试剂盒加 样:室温温育的试剂,特别是温育时间比较短的实验操作的试剂,加样对数据的影响比较大,特别要注意加样问题。
不好的操作原因:
不会正确使用加样器;
血清或血浆标本分离不好即进行加样;
手工操作中,加样板过多造成加样後放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时);
加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。

原创作者:上海基免科研试剂网

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