天然蛋白去糖基化试剂盒

 此试剂盒在去糖基化上的作用怎么呢？美国西北大学的博士生A. Caulfield介绍了他的运用心得。

据Caulfield介绍，他们想要断定意图蛋白在去糖基化以后的生物学活性。糖基化的去掉可经过Western blot来评价，即蛋白条带的分子量削减。他们的意图蛋白包含N衔接糖基化。此蛋白在HEK 293细胞中产生，并利用其N端的FLAG标签来纯化。之前他们试过PNGase，但无法让意图蛋白去糖基化。                 

在这一试验中，他们将2 ug意图蛋白与0.02个单位的内糖苷酶F1、F2或F3及其相应的缓冲液混合，在37°C孵育4小时。以后经过规范的SDS-PAGE和Western blot来评价去糖基化的程度。

正如他们估计的那样，蛋白被去糖基化，且各个样品之间的成果相当共同。风趣的是，内糖苷酶F1对他们的蛋白起作用，而F2和F3则完全没作用。Caulfield以为，了解哪种酶能使蛋白去糖基化，将带来一些有关寡糖链性质的信息。

Caulfield以为这一试剂盒简略易用，适用于所有研讨蛋白糖基化的研讨人员。当然，跟着蛋白底物不一样，反响条件也许也需求调整。

Sigma-Aldrich供给了多种去糖基化试剂盒，包含GlycoProfile I In-Gel Deglycosylation Kit、GlycoProfile II Enzymatic In-Solution Deglycosylation Kit、GlycoProfile IV Chemical Deglycosylation Kit等，适用于溶液或PAGE胶中的糖蛋白，与下流多个剖析（如质谱剖析或功用研讨）兼容。