免疫组化实验过程中操作的方法是什么

1.固定：最好用 4% 的多聚甲醛固定液。关于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好；但关于不同的安排和抗原，可选用不同的固定液。 有时候商品化的抗体会有比较适宜而引荐的固定液，请于置办前留意说明书。

Bouin S 固定液：饱满苦味酸 750ml ，甲醛 250ml ，冰醋酸 50ml ，其对安排的穿透力较强，固定较好，结构完好，但因偏酸，对立原有必定损害，且安排收缩明显，不适于安排标本的长期保存。

PLP 液：即高碘酸钠 - 赖氨酸 - 多聚甲醛，适于固定白腊切片。适于富含糖类安排，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。

2 ．安排脱水，通明：时刻不能太长，否则在切片时简单碎片，切不完好。

3 ．切片时展片：有些安排在切片后难以在水中打开，这时可适当地在水中参加几滴乙醇。

4 ．烤片： 60℃ 30 分钟或 37℃ 过夜，温度太高或时刻太长，抗原简单丢失。

5 ．蜡块及切片的保存：最好在 4℃ 保存

6 ．脱片问题： Poly-L-Lysine( 多聚赖氨酸 ) 为现在免疫组化染色作业中最常用的一种防脱片剂， 6ml 的多聚赖氨酸溶液可按 1:10 稀释成 60ml 的作业液，适宜于需要酶消化、微波、高温高压的防脱片处理。如不行，可用两层处理（ APES 和 Poly-L-Lysine ）的切片。在以上两种条件都行不通的情况下，可用如下办法：切片在脱蜡前，放在 APES 1 ： 50 丙酮溶液中浸泡 3 分钟，晒干，即可进行下一步。

7 ．灭活内源性酶： HRP 体系： 3% 双氧水灭活； AP 体系： 3%HAc 灭活。

8 ．露出抗原：关于白腊切片的免疫组化试验时，有必要选用高温加热抗原修正，这将有助于露出抗原决定簇，然后添加免疫组化染色的强度 ( 不同抗体的最佳修正液请参阅抗体说明书 ) 。关于不同的安排，不同的抗原，不同的抗体，所选用的办法应不一样，可进行热修正、胰酶消化、既不修正也不消化。胶原还可以用胃蛋白酶消化等。

9 ．关闭：在山羊血清关闭，非特异性染色依然较强时，可延长关闭时刻或用浓缩血清关闭

10 ．抗体稀释：应遵从 “ 现用现配 " 的原则，关于 PBS 稀释的抗体必定要当天使用。

11 ．布景高：在抗体浓度、反响时刻、反响温度等适宜的条件下，如果布景照旧高，可选用含 1‰ Tween20 的 PBS 洗，特别是在显色之前要多洗。

12 ．返蓝：在苏木素复染后，可用碱性缓冲液（如 PBS ）或 Na2HPO4 的饱满溶液返蓝。

13 ．显色：必定要在显微镜下调查，留意操控布景。