酶联免疫吸附实验的双位点一步法

适用于双抗体夹心法的elisa试剂盒，有些也可用双位点一步法检测。如HBsAg相同可用此法进行检测，其原理为：将纯化的抗HBs吸附于固相载体外表，参加待检血清(或血浆)，一起参加辣根过氧化物酶符号的另一个抗HBs(酶结合物)，如血清或血浆中含有HBsAg，则经过温育构成固相McAb-HBsAg-酶标McAb复合物，参加底物，经过显色反响进行测定。若血清或血浆中不含HBsAg，经过洗刷除掉未结合物，加底物后就不显色。因为使用McAb，双位点一步法具有很高特异性，一步法省时、简洁。

在双抗体夹心法测定抗原时，如使用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体别离作为固相抗体和酶标抗体，则在测守时可使标本的参加和酶标抗体的参加两步并作一步。这种双位点一步法不光简化了操作，缩短了反响时间，如使用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也明显进步。单克隆抗体的使用使测定抗原的ELISA进步到新水平。

在一步法测定中，应留意钩状效应（hookeffect），类同于沉积反响中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度适当高时，过量抗原别离和固相抗体及酶标抗体结合，而不再构成夹心复合物，所得成果将低于实践含量。钩状效应严峻时乃至可呈现假阴性成果。

双位点一步法的操作步骤

1、将1个McAb与固相载体连接，构成固相McAb。洗刷除掉未结合物。

2、一起参加待检标本和酶标McAb，温育，是待检抗原和固相McAb及酶标McAb反响构成双抗体夹心复合物。洗刷除掉未结合物。

3、加底物显色。

双位点一步法留意事项

当待检抗原浓度过高时，很多过剩抗原别离饱满固相McAb和酶标McAb而按捺夹心复合物的构成，这种现象称为钩状效应(hook effect)，可呈现假阴性成果。可将待检标本稀释后再做或进步抗体试剂的亲和力、浓度、纯度定以消除钩状效应。

Elisa试剂盒双位点一步法使用辨认抗原不同位点2个单克隆抗体(McAb)作双抗体夹心法测定。包被一个McAb后，一起参加待检抗原和另一个McAb酶标物，待检抗原上的2个抗原决定簇一起与固相McAb和酶标McAb结合，构成固相McAb-待检抗原-酶标McAb复合物，加底物经过显色反响进行测定。