ELISA试剂盒实验原理剖析办理

elisa试剂盒方法被广泛使用于各种抗原和抗体测定，具有灵敏度高，操作简单等长处，但是在详细试验过程中影响要素较多，而且要依照严格的阐明要求，在临床查验中除正常反响外，有时常可见到一些过错成果（即假阳性或假阴性成果）。

致使ELISA测定过错成果的要素主要有：①标本要素；②试剂要素；③操作要素。这篇文章就标本要素对ELISA测定的影响做如下评论。

（1）类风湿因子

人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）能够与ELISA体系中的捕获抗体及酶符号二抗的FC段直接联系，然后致使假阳性。ELISA检查试剂盒处理该状况的方法是：①用F（ab）2代替完好的IgG；②标本用联有热变性（63℃，10 min）IgG的固相吸附剂处理（将热变性IgG参加到标本稀释液中相同有用）；③检查抗原时，能够用等参加到标本稀释液中，使RF降解。

（2）补体

ELISA试剂盒体系中固相一抗和符号二抗过程中，抗体分子发作变构，其FC段的补体C1q分子联系位点被露出出来，使C1q 能够将二者连接起来，然后构成假阳性。处理的方法是：①用EDTA稀释标本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加热血清使C1q灭活。

（3）嗜异性抗体

人类血清中含有能与啮齿类动物（如鼠等）Ig （s） 联系的天然嗜异性抗体，可将ELISA体系中一抗和二抗连接起来，也能构成假阳性。处理的方法是：可在标本稀释液中参加过量的动物Ig （s） ，但参加量缺乏或亚类不一起无效。

（4）嗜靶抗原的本身抗体

抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的本身抗体，有时能与靶抗原联系构成复合物，在ELISA方法中均可搅扰抗原抗体测定成果。为防止以上状况呈现，处理的方法是：测定前需用理化方法将其解离后再测定。

（5）医源性诱导的抗鼠Ig （s） 抗体

展开的用鼠源性CD3等单克隆抗体医治，用放射性同位素符号鼠源性抗体的印象确诊及靶向医治等新技术，均有可能使这些患者体内发生抗鼠抗体；别的，被鼠等啮齿类动物咬伤的患者体内也能够发生抗鼠Ig （s） 抗体。这些患者ELISA测守时均可发生假阳性。处理的方法是：测定抗原时，在标本中参加足量的正常鼠Ig （s） ，然后战胜由于上述要素构成的假阳性。

（6）穿插反响物质

类AFP样物质等，是与靶抗原有穿插反响的物质。在用多抗测定抗原时对测定成果影响不大，但在用单克隆抗体测定抗原时，假如穿插抗原决定簇正好是所用单克隆抗体相对应的靶决定簇时，也会呈现假阳性成果。

（7）标本中其它成分的影响 血清脂质过高、胆红素、血红蛋白及血液粘度过大等，ELISA试剂盒均对ELISA测定成果有搅扰效果。