ELISPOT与ELISA法试验过程中的对照

ELISPOT的起源能够追溯到1963年Jerne等人创建的溶血空斑技能（hemo-lytic plaque forming cell assay ，HPF），这项技能可用于检查并计数单个抗体形成细胞。跟着单克隆抗体技能的老练，1983年，Czerkinsky等选用此法检查脾细胞中排泄特异性抗体的细胞数，发现该办法敏感性高简便易行。后来，他们又用这种办法定量剖析受到有丝分裂原影响的外周血中排泄IFN2γ的细胞数。随后，用ELISPOT法在单细胞水平检查排泄其他细胞因子（如IL-2 ， IL-4 ， IL-5 ， IL-10 ， TNFα和IL-6） 数量的手法也被建立起来。Nordstrom 等用生物素-抗生物素蛋白生物放大法来提高这种办法的敏感性，Herr用核算机辅佐图画剖析体系（computer-assisted video image analysis ，CVIA） 主动剖析TNF2α酶联免疫斑驳的巨细和数量，核算与负载抗原肽的靶细胞触摸后外周血单核细胞（PBMC） 中抗原特异性CD8+T细胞的数量，不光提高了对布景染色的分辨力也使大规模研讨成为可能。Vaquerano等将数码相机和核算机联系起来，开宣布相似的斑驳计数体系，认为当每孔斑驳数大于100时，这种办法更客观、可重复性高且节省时间。

跟着ELISPOT技能的不断发展，它的优势也逐渐显示出来，下面将ELISPOT与ELISA法比照区别。

ELISA 经过显色反响，在酶标仪上测定吸光度，与规范曲线对比得出可溶性蛋白总量。

ELISPOT 也是经过显色反响，在细胞排泄这种可溶性蛋白的相应位置上闪现明晰可辨的斑驳，可直接在显微镜下人工计数斑驳或经过核算机辅佐的剖析体系对斑驳进行计数， 1个斑驳代表1个细胞，然后核算出排泄该蛋白的细胞的频率。（某些研讨不只要测细胞因子生成量，还需检查排泄此细胞因子的细胞频率）

由所以单细胞水平检查，ELISPOT比ELISA更活络，能从20万-30万细胞中检出1个排泄该蛋白的细胞。

捕获抗体具有高亲和力、高特异性、低内毒素的单抗，在研讨者以影响剂激活细胞时，不会影响活化细胞排泄细胞因子。

目前ELISA法仍在研讨傍边占有着干流地位，elisa试剂盒的遍及使用使得实验愈加便利、经济和精确，ELISPOT技能的长处也决议了它的发展潜力。