台盼蓝染色法与中性红法

一、台盼蓝染色法

此方法原理是死细胞被台盼蓝染成蓝色，而活细胞不着色，故亦称拒蓝染色法，此法简便，快速，但不能准确地反映细胞代谢活性差异。

(一)材料

1．单细胞悬液。

2．O．4％台盼蓝溶液O．4g台盼蓝溶于100ml PBS或生理盐水中，经滤膜过滤，4℃保存备用。

3．血细胞计数器、显微镜等。

(二)方法

取O．2珊细胞悬液等量加0．4％台盼蓝溶液，充分混匀，然后滴加少许于载玻片上，覆以盖玻片，低倍镜下计数至少200个细胞，死细胞被染成蓝色，活细胞不着色呈无色透明状。

(三)结果

细胞的存活率计算公式如下：

细胞存活率=未蓝染细胞数／(蓝染细胞数+未蓝染细胞数)×100％

(四)注意事项

1．最好用24 7L或孔数少于24的培养板，避免细胞数太少不能制备细胞悬液。

2．细胞悬液要充分混匀，充分分离细胞。

二、中性红法

中性红是常用的活体染色染料，可被活细胞摄取并使溶酶体着色。可直接用于活体细胞的染色和显微镜下观察，或用于观察细胞的病毒蚀斑，肉眼计数空斑数目。因其毒性大，染色后细胞不能再培养。

(一)材料

1．96孔培养板培养的待测细胞。

2．0．15％的中性红溶液：用生理盐水(或Hanks液)溶解中性红，经高压蒸气灭菌后在暗处存放。

3．细胞固定液：乙酸和乙醛的混合物，各含1％。

4．中性红提取液：乙酸和乙醇的混合物，含乙酸1％、乙醇50％。

(二)方法

将培养板上培养细胞的培养液弃掉，加入0．15％中性红溶液0．1ml，培养3h后弃掉中性红溶液。加入细胞固定液0．2ml固定5min，弃固定液，加人中性红提取液0．1ml，在测定波长570nm、参考波长650nm处比色。

(三)结果分析

以每孔细胞的吸光度值反映细胞的活性，吸光度值越大，说明细胞活性越好。可用中性红相对摄取率(％)来反映实验因素对细胞增殖状态的影响，即受试组的吸光度值与对照组吸光度值的百分率。

(四)注意事项

在加人中性红提取液之前，要将培养板孔内残留的中性红溶液彻底洗干净，以免影响最终结果。

原创作者：上海一研生物科技有限公司