ELISA检测e抗原试验程序

E抗原是从乙肝表面抗原（HBsAg）阳性血清中发现的一种新抗原，他可能与乙型肝炎的传染性有密切关系。用ELISA检测e抗原的灵敏度比琼脂免疫扩散法高150—300倍。试验程序：
1.病人免疫球蛋白IgG（e抗体）的提取：用饱和硫酸铵沉淀法处理上述抗体阳性人血清所得粗提液过柱（DEAE-Cellulose）收集IgG阳性部分，再穿流正常人血清柱。得IgG（e抗体），浓缩为5ng/ml贮藏放于冰箱中。
2.酶标记IgG（e抗体）的制备：用戊二醛二步法，将10mg HRP交联5 mg IgG（e抗体），分装于小瓶，在低温（-20°C）下保存。
3.ELISA对e抗原的检测:
a. IgG（e抗体）包被聚苯乙烯微量反应板，在4°C过一夜（IgG浓度为25r/ml）。
b.洗涤3-5次。
c.加待检病员血清（1:10稀释，每份标本加两孔，每孔0.1ml,37°c孵育2h）.
e.洗涤3-5次。
f.加酶标记IgG（e抗体），37°C孵育2h（酶标记IgG稀释度为1:640）。
g.洗涤3-5次。
h.加底物与供氢体（H2O2与OPD）,置于暗处反应30min.
i.加2mol/L硫酸终止反应。
j.每板均设阳性与阴性对照，根据不同的显色反应予以判断。
k.经过上诉方法检测初步确定为阳性的标本，取两份，一份加足量的e抗体血清，另一份加正常人血清，在37°C孵育1h，然后再按上述方法测定e抗原。加e抗原体血清者，在显色反应受到控制（与正常血清对比）时才可判断为e抗原阳性。
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