细胞污染的检测与排除

细胞污染主要是指细胞培养液中混入对细胞生存有害的成分或细胞成分不纯。细胞培养时的污染主要包括3个方面：①微生物污染：如支原体、病毒、细菌和真菌。②化学污染：如重金属或其他非培养必需化学试剂。③细胞交叉污染。

一、细胞污染的检测

(一)真菌污染

在微生物污染中，以真菌污染最多。最常见真菌：烟曲霉、黑曲霉、毛霉菌、白念珠菌、酵母菌等。真菌种类繁多，形态各异，但污染后很容易发现。肉眼可见，大多呈白色或最黄色小点漂浮于培养液表面；镜下观察呈丝状、管状或树枝状菌丝，纵横交错穿行于细胞之间。但是念珠菌和酵母菌呈卵圆形态，散在于细胞周边和细胞之间牛长。

(二)细菌污染及其检测

大肠埃希菌、枯草杆菌、假单胞菌和葡萄球菌等是较常见的污染细菌。细菌污染后大多能改变培养液pH使培养液变混浊；多数情况下培养液短期内颜色变黄，出现明显污浊现象。也有的对培养液无肉眼可见影响，只在镜下观察发现菌体时才能感知污染。

(三)支原体污染

支原体污染是细胞培养中最常见、不易被察觉并可以干扰实验结果的一种污染。细胞受支原体污染后，多数细胞无明显变化，或有微细变化却由于传代和换液而被缓解。外观上往往给人以“正常”的感觉，实则污染细胞会受到多方面潜在的影响，如细胞变形、抑制细胞生长。

不同的微生物污染对细胞的影响有差别，检测方法也不尽相同：可以通过目测、显微镜观察、电镜检查、微生物培养实验、免疫学和分子生物学等方法进行确定。

二、细胞污染的排除

培养的细胞一旦被微生物污染，应及时处理。通常选高压灭菌被污染的细胞，然后弃掉。如果有价值的细胞被污染，并且污染程度比较轻，可通过及时排除污染物，挽救细胞恢复正常。常用的排除微生物污染方法有如下几种：

(一)抗生素排除法

抗生素是细胞培养中杀灭微生物的主要手段。一些有价值的细胞被污染后，需用抗生素挽救，在这种情况下，可采用5～lO倍于常用量的冲击法，加入高浓度抗生素后作用24～48h，再换人常规培养液。

(二)加温除茵

根据支原体耐热性能差的特点。有人将受支原体污染的细胞置于4l℃中作用5～10h(最长可达18h)以杀灭支原体。但41℃对培养细胞本身也有较大影响，故在处理前，应先进行预试验。确定m最大限度杀伤支原体而对细胞影响较小的处理时间。

(三)动物体内接种

受微生物污染的肿瘤细胞可接种在同种动物皮下或腹腔，借动物体内免疫系统消灭污染的微生物，肿瘤细胞却能在体内继续生长，待一定时间后，从体内取出再进行培养繁殖。

(四)与巨噬细胞共培养

在良好的体外培养条件下巨噬细胞可存活7～10d，并可分泌一些细胞生长因子支持其他细胞的克隆生长。与体内的情况相似，巨噬细胞在体外培养条件下仍然可吞噬微生物并将其消化。利用96孔培养板将极少量的培养细胞与巨噬细胞共培养，可以在高度稀释培养细胞、极大地降低微生物污染程度的同时，更有效地发挥巨噬细胞清除污染的效能。本方法与抗生素联合应用效果更佳。

原创作者：上海一研生物科技有限公司