人胚肾细胞的体外培养方法

采用比较容易获得的人来源组织和器官进行体外细胞培养，对医学研究相关组织器官的生物学性状及相关疾病的发生机制等起到很重要的促进作用，因为这些组织与人体器官组织最接近，实验结果也最接近。常用的组织包括人胚组织和手术切下的肿瘤组织等。本章主要介绍用途较广的人胚肾细胞、人胚肺细胞、人脐血内皮细胞及羊水细胞和肿瘤细胞等的培养方法。

在研究肾脏疾病的发生、发展机制时，常常需要体外培养肾细胞。

一、材料与试剂

1．肾组织来自水囊引产或自然流产的妊娠12~20周的胎儿。

2．培养液常使用含20％胎牛血清的DMEM培养液(100U／ml青霉素、100μg／ml链霉素)。

3．消化液使用0．25％胰蛋白酶。

4．清洗液Hanks液+100U／ml青霉素+100μg／ml链霉素。

5．器材解剖刀、镊子、眼科剪、100目筛网、恒温电磁搅拌器、平皿、培养瓶等。

二、操作方法

1．解剖取肾 用75％乙醇消毒胎儿腰、背部皮肤，无菌条件下迅速取出肾脏放人平皿。剥离被膜、脂肪，去除肾门部组织后，用清洗液洗3次，移入另一个装有清洗液的平皿内，剪取肾浅表的皮质组织，剪成肉泥状，用清洗液洗3次，尽量除净血细胞。

2．细胞消化 加0．25%胰蛋白酶，放人37℃恒温电磁搅拌器上消化30min，然后低速500r／min离心5min，弃上清液，加入适量的培养液，摇匀，于100目筛网过滤细胞悬液。依上述条件再离心1次，弃上清液，加入适量培养液，重悬细胞。

3．细胞培养细胞计数，将细胞以3×106个／ml密度接种于培养瓶内常规培养，逐日观察细胞生长情况。成功者于次日可见细胞贴壁生长，此时换液，弃去未贴壁的细胞及细胞碎片。以后每隔2～3d换液一次(每次换液50％)。

三、结果观察

一般肾细胞在4～6d后可长成单层细胞供使用。肾细胞之间可能混有血细胞，经过几次传代后可以除去。

四、注意事项

1．药物引产的胎儿不宜使用。胎儿死亡时间不应超过10h。

2．严格无菌操作。

3．最初接种的培养瓶应尽量小些，而接种的细胞数应尽量多些。

原创作者：上海一研生物科技有限公司