机械力敏感通道的机械耦合机制进展

随后研究人员通过几何学分析方法研究发现MscL在扩展过程中其跨膜螺旋发生大幅度的倾斜，其运动模式类似于“光圈开放”的过程，跨膜螺旋与N-末端螺旋之间的动态变化则类似于雨伞打开的过程。该通道扩展时，各个部件会互相联动，使不同亚基同步发生构想变化。

机械力感应现象在动植物和微生物中普遍存在。机械力信号的感应过程是由细胞膜上的机械力敏感通道来介导的。高通量机械力敏感通道是微生物感应细胞膜张力的一类通道膜蛋白，帮助细胞稳定其内外的渗透压平衡，对细菌等微生物适应多变的环境起重要的作用。近年来的研究发现MscL可以为抗生素药物提供进入细菌细胞的通道，被认为是抗生素药物的作用靶点,并可被改造为光控纳米阀门用于释放脂质体包裹的药物分子，具有潜在的应用价值。在基础研究方面，MscL被认为是研究机械力信号跨膜传递的理想模式分子，其在感应膜张力过程中的构象变化原理还有待于通过结构生物学方法来阐明。

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ELISA试剂盒操作程序：

① 加抗体包被 → 4℃**，洗涤三次、抛干

② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干

③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干

④ 加底物液　→ 37℃ 15分钟，加终止液

⑤ 用ELISA检测仪测定OD值

显色的重要性：

显色是ELISA中的最后一步温育反应，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中，加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。定性测定的显色可在室温进行，时间一般不需要严格控制，有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显色情况适当缩短或延长反应时间，及时判断。

OPD底物显色一般在室外温或37℃反应20-30分钟后即不再加深，再延长反应时间，可使本底值增高。OPD底物液受光照会自行变色，显色反应应避光进行，显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD产物用酸终止后，显色由橙黄色转向棕黄色。

TMB受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性，宜在规定的适当时间阅读结果。TMB经HRP作用后，约40分钟显色达顶峰，随即逐渐减弱，至2小时后即可完全消退至无色。TMB的终止液有多种，叠氮钠和SDS等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间(12-24小时)不褪，是目视判断的良好终止剂.此各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色，此时可用特定的波长(450nm)测读吸光值。