大型蛋白互作图谱 阐明疾病机理

研究者揭示了成千上万种新型的蛋白质相互作用方式，其中大约有四分之一的作用都是细胞内部蛋白质的接触作用。当其中一种反应缺失就会引发机体疾病的发生，而绘制多种蛋白质相互作用的图谱或可帮助研究人员理解复杂的人类疾病的发病根源；细胞中蛋白质往往通过彼此吸附来行使某些细胞功能，很多蛋白质都会形成所谓的分子机器，在细胞中扮演重要角色，比如构建新型蛋白或细胞循环等，但对于大多数蛋白质而言，研究人员并不清楚其具体的作用机制。

研究者表示，自从第一个原始祖先细胞出现以来我们发现了成千上万种蛋白质的协作关系并未改变，而蛋白质在人类机体中的装配方式和在其它物种中类似，这不仅可以增强我们对共同进化祖先的了解，也对于后期研究具有一定的帮助，或可帮助研究者们理解多种疾病发病的遗传基础。

最后研究者表示，随着我们绘制出成千上万种新型蛋白质的相互作用方式，我们的图谱获奖帮助研究多种蛋白互作和人类疾病的关系，或为未来开发治疗人类多种疾病的新型疗法提供新的思路。

试剂盒实验原理：

用纯化的MT抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的MT抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物（TMB）显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的MT呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒操作步骤：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温，试剂不能直接在37 溶解；试剂或样品配制时，均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应注意样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1、 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100 ，余孔分别加标准品或待测样品100 ，注意不要有气泡，加样 时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37 温育2小时。为保证实验结果有效

性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2、 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100 （临用前配制），酶标板加上覆膜，37 温育1小时。

3、 弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约400 /每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4、 每孔加检测溶液B工作液（临用前配制）100 ，加上覆膜，37 温育1小时。

5、 弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。

6、 每孔加底物溶液90 ，酶标板加上覆膜37 避光显色（反应时间控制在15-30分钟，当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止）。

7、 每孔加终止溶液50 ，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物 液的加入顺序相同。

8、 立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度（OD值）。