免疫组化双染试剂盒的实验流程

即用型过氧化酶阻断剂 6ml
即用型正常动物非免疫血清 12ml
即用型生物素标记的第二抗体 12ml
即用型链霉菌抗生物素蛋白-碱性磷酸酶 6ml
即用型碱性磷酸酶显色液 6ml
即用型双染增强液 6ml
即用型链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶6ml
过氧化酶底物缓冲液 1.5ml
过氧化酶底物 1.5ml
过氧化酶染色液 1.5ml
即用型苏木素复染液 6ml
即用型水性封片剂 6ml

免疫组化双染试剂盒的实验流程:

脱蜡和水化
方法同SP法。
第一抗体的染色
1.将切片浸在3%H2O2甲醇溶液（新鲜配制）中10 min，PBS冲洗3 min×3次；
2.加100 ul（2滴）血清封闭溶液到切片上，室温孵育10 min，倒掉（不能冲洗）；
3.加入一抗（按照说明书推荐浓度和孵育条件）；
4.使用含有0.05%吐温20的PBS（ TPBS），冲洗5 min×3次；
5.加入100 ul（2滴）生物素化的二抗，室温孵育10 min；
6.用TPBS冲洗5 min×3次；
7.加入100 ul（2滴）链霉亲和素-AP的二抗，室温孵育10 min；
8.用TPBS冲洗5 min×3次；
9.准备底物溶液：将1滴试剂4A和4B加入到1 ml去离子水中，充分混匀。再加入1滴试剂4C，充分混匀；
10.加100 ul（2滴）配好的AP底物溶液，室温孵育；
11.使用含有0.05%吐温20的去离子水冲洗终止反应。
第二抗体的染色
12.加100 ul（2滴）双染增强剂，孵育；
13.用TPBS冲洗3 min×3次；
14.加100 ul（2滴）血清封闭溶液到切片上，室温孵育10 min，倒掉（不能冲洗）；
15.加入稀释好的一抗（按照说明推荐浓度和孵育条件）；
16.用TPBS冲洗5 min×3次；
17.加入100 ul（2滴）生物素化的二抗，室温孵育10 min；
18.用TPBS冲洗5 min×3次；
19.加入100 ul（2滴）链霉亲和素-HRP的二抗，室温孵育10 min；
20.用TPBS冲洗5 min×3次；
21. 准备底物溶液：将1滴试剂6A和6B加入到1 ml去离子水中，充分混匀。再加入1滴试剂6C，充分混匀；
22、 加100 ul（2滴）配好的HRP底物溶液，室温孵育；
23.使用含有0.05%吐温20的去离子水冲洗终止反应；
24.使用复染试剂染色（根据需要选择）；
25.封片剂封片，显微镜观察并拍照。

原创作者：江苏菲亚生物科技有限公司