PK-15细胞低血清培养

一、PK-15细胞低血清培养：

1、细胞形态

在方瓶中使用低血清培养基（MD611）逐代降低血清使用量，进行细胞的低血清驯化适应，在低血清培养状态下，细胞具有清晰的轮廓、立体感较强，细胞更致密，与原培养液的细胞形态无差异。

2、细胞增殖情况

PK-15细胞以一定接种密度（3-4×104个/cm2）接种方瓶进行连续传代，3d左右细胞可形成单层或致密单层，需及时传代。如下图所示，使用低血清培养基+5%NBS培养的细胞与DMEM+10%NBS培养的增殖速率基本无差别，细胞3d可增殖6-7倍，细胞数可达2×107个/T75。

二、MD611低血清培养基的配制方法：

MD611培养基不同于传统的培养基，培养基的正确配制和使用方法影响细胞的培养效果，应严格按使用说明书配制使用。以50L/包规格低血清培养基为例，应按以下程序配制培养基。

1.打开培养基包装，将培养基全部倒入一容器中。

2.用少量冷却注射用水（20℃～30℃）涮洗袋内残留培养基，倒入容器内。

3.向容器中加入约40L冷却注射用水（20℃～30℃），搅拌至培养基完全溶解。

4.按使用说明书标示量加入114.5克碳酸氢钠，搅拌至完全溶解，补加冷却注射用水（20℃～30℃）至50L，充分混合，用pH计检测，溶液pH应为7.2～7.4。

5.按使用量加入血清和抗生素，混合均匀，用0.22μm滤膜正压过滤除菌。

6.除菌后培养基，置2℃～8℃避光保存。

三、MD611低血清培养基一些注意事项：

1.不可配制成浓缩液储存使用。

2.不可用高压湿热法进行灭菌。

3.不可冷冻储存，再溶解使用。

4.不可常温储存，2～8℃储存。

5.该培养基中已含谷氨酰胺，由于谷氨酰胺不稳定，易分解，产生对细胞敏感的毒性物质，故加入血清的完全培养液应尽快使用完毕。

6.该培养基中所含指示剂酚红的量是常规量的一半，故从外观上看所配溶液颜色较浅，精确判定pH时，建议用pH计测定pH。

以上是我们公司总结的经验，为客户提供来样检测服务，最大限度实验结果的有效性（费代测），可以享受本公司完善的售后服务和技术支持。

ELISA试剂盒规格：

（1）96T可用做84个标本，12个标准曲线；

（2）48T可用做42个标本，6个标准曲线；

ELISA试剂盒组成：

（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；

（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；

（3）酶的底物；

（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；

（5）结合物及标本的稀释液；

（6）洗涤液；

（7）酶反应终止液。

保存条件：2-8℃低温保存；

保质期：六个月；

用途：科研实验等领域科学研究，不得用于临床诊断。

原创作者：江苏菲亚生物科技有限公司