简易且能避免污染的细胞培养方法

第一步，配制1L培养液。培养基中含有酚红指示剂，偏碱时液体为深红或紫色，偏酸时则呈黄色。取配1L培养液的粉剂培养基，加入750ml三蒸水或去离子水，摇匀(一般培养液呈橘红色)；再加入碳酸氢钠1～1．1g，至完全溶解(呈深红色)；最后再加三蒸水或去离子水至1L止。

第二步，插吸管于配好的培养液内，通入二氧化碳气体。随着二氧化碳气的融人，液体逐渐变成黄色。用一次性0．22 m孔径的滤膜于正压情况下将该液体过滤除菌。在此过程中，由于部分二氧化碳气体溢出，液体渐成橘黄色。此时迅速将其分装到4个250ml的瓶内，一定塞严或拧紧瓶。在无菌情况下取样本数毫升，37。c无菌培养72h，确定该批培养液无污染后方可使用。常使用的培养液存放于4℃冰箱内，其它暂时不用的可放入一20。c冰箱内保存。

第三步，根据不同细胞系的需求添加不同量血清和抗生素。将配好的培养液吸入小培养瓶内，再将适量细胞吸入，塞严或拧紧瓶盖，置37。c普通隔水式恒温箱内即可。操作过程中因有少量二氧化碳气体溢出，液体呈橘红色，酸碱度(pH) 约为7．0～7．2。如果细胞较少或者生长较慢。液体的pH值似宜偏酸些为好。

elisa试剂盒规格：

（1）96T可用做84个标本，12个标准曲线；

（2）48T可用做42个标本，6个标准曲线；

ELISA试剂盒组成：

（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；

（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；

（3）酶的底物；

（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；

（5）结合物及标本的稀释液；

（6）洗涤液；

（7）酶反应终止液。

保存条件：2-8℃低温保存；

保质期：六个月；

用途：科研实验等领域科学研究，不得用于临床诊断。

ELISA试剂盒使用建议：

1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6． 底物请避光保存。

7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9． 本试剂不同批号组分不得混用。

原创作者：江苏菲亚生物科技有限公司