ELISA试剂盒实验操作通用知识

2、ELISA试剂盒标签要写上配制者姓名和日期， 日期不仅要包括月和日， 年也要写上。可能一瓶试剂存在的年头比你在实验室的时间都长。

3、有机玻璃不能用酒精擦拭， 否则会变白， 模糊不清。

4、不要把注射器丢弃在普通垃圾桶内。不要把针头从针套拿出来， 把针头带着针套连同针管一起丢在尖锐物品回收的盒子里。

5、进入动物实验室保持戴口罩的习惯， 避免患上过敏症。

6、对于实验室的女性来说， 尤其要注意：

① 禁止在实验室化妆、处理隐形眼镜； 不提倡在实验室佩戴首饰。

② 长发必须盘在脑后并扎起来， 以免接触手、样品、容器或者设备。

③ 不提倡穿短裙和露脚趾的鞋子。

7、提倡从事实验工作的女性应在计划怀孕前三个月开始脱离实验室中确切的危险因素或少接触（包括男方） ， 并进行有关优生优育方面的检查。后定期的产科检查和超声检查可以了解胎儿的生长发育情况。现今已肯定的实验室中常见的人类致畸原有：

① 化学物： 甲基汞、聚氯联苯（PCB） 、2,4‐D‐二噁英杀虫剂、苯、二甲苯、甲苯。
② 微生物感染： 病毒类（风疹病毒、巨细胞病毒、水痘病毒、单纯疱疹病毒、带状疱疹病毒、梅毒螺旋体、人类免疫缺陷病毒等） 。

③ 物理因素： 放射性同位素等电离辐射。

④ 如果进行动物实验要注意动物携带和传染微生物感染的可能。

⑤ 影响不仅仅存在于妊娠期， 在分娩后哺乳期， 有些致畸原还可以通过母乳输送给婴儿， 使婴儿在后天仍继续积累某种毒物而损害生长发育。

⑥ 致畸原对生育的影响取决于怎样接触、接触的剂量和暴露时间的长短。做好个人防护措施尤为重要。

试剂盒实验原理：

用纯化的MT抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的MT抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物（TMB）显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的MT呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒操作步骤：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温，试剂不能直接在37 溶解；试剂或样品配制时，均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应注意样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1、 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100 ，余孔分别加标准品或待测样品100 ，注意不要有气泡，加样 时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37 温育2小时。为保证实验结果有效

性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2、 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100 （临用前配制），酶标板加上覆膜，37 温育1小时。

3、 弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约400 /每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4、 每孔加检测溶液B工作液（临用前配制）100 ，加上覆膜，37 温育1小时。

5、 弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。

6、 每孔加底物溶液90 ，酶标板加上覆膜37 避光显色（反应时间控制在15-30分钟，当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止）。

7、 每孔加终止溶液50 ，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物 液的加入顺序相同。

原创作者：江苏菲亚生物科技有限公司