鸡ELISA试剂盒试验注意事项有哪些？

1、仔细阅读说明书
2、确定试剂盒在有效期内
3、按说明书确定所有试剂齐全（数量、体积）
4、标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备（贮存），尽量分装做备份。短期内无法实验者，注意低温保存
5、准备好所有实验额外所需物品，如试管、吸头、移液器、离心机等
6、根据检测标本数量确定所需试剂的量
7、按说明书将所用试剂平衡至室温，配制所需试剂
ELISA试验时，注意事项如下：
1.正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2.在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括：
（1）固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
（2）包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。

规 格：48T/96T

产品的用途：仅供科研ELISA检测试剂盒

检测的原理：采用双抗体夹心ABC-ELISA法。

标本的处理：

（1）细胞培养上清液

根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品，然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是稀释5倍。

（2）脑脊液

根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品，然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是5倍。

（3）血浆

①用EDTA2K离心收集在真空血液收集管中的血液，5,000×g，15分钟，4℃，分离血浆样品，然后储存在零下80℃直到使用。

②用试剂盒中的标准稀释液5倍稀释血浆以避免血浆中的干扰物质影响检测，按照说明书指定方法检测。

实验过程中酶标比色仪的使用：

酶标比色仪简称酶标仪，通常指专用于测读ELISA结果吸光度的光度计。针对固相载体形式的不同，各有特制的适用于板、珠和小试管的设计。许多试剂公司配套供应酶标仪。酶标仪的主要性能指标有：测读速度、读数的准确性、重复性、精确度和可测范围、线性等等。优良的酶标仪的读数一般可精确到0.001，准确性为±1%，重复性达0.5%。举例说，若某孔测得的A值为1.083，则该孔相对于空气的真实A值应为1.083±0.01(1.073～1.093)，重复测定数次，其A值均应1.083±0.05(1.078～1.088)在之间。酶标仪的可测范围视各酶标仪的性能而不同。普通的酶标仪在0.000～2.000，新型号的酶标仪上限拓宽达2.900，甚至更高。超出可测上限的A值常以"*"或"over"或其它符号表示。应注意可测范围与线性范围的不同，线性范围常小于可测范围，比如某一酶标仪的可测范围为0.000～2.900，而其线性范围仅0.000～2.000，这在定量ELISA中制作标准曲线时应予注意。

酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，操作时室温宜在15～30℃，使用前先预热仪器15-30分钟，测读结果更稳定。

测读A值时，要选用产物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波长。有的酶标仪可用双波长式测读，即每孔先后测读两次，第一次在最适波长(W1)，第二次在不敏感波长(W2)，两次测定间不移动ELISA板的位置。例如OPD用492nm为W1，630nm为W2，最终测得的A值为两者之差(W1-W2)。双波长式测读可减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

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原创作者：江苏菲亚生物科技有限公司