细胞株采购注意事项及种属通用操作步骤与elisa试剂盒实验关系

由于现在国内的细胞库资料不是很充足，而且比较零散，包括建株时的技术层面不一，没有比较严格统一的操作规范，所以在遇到比较重要的实验项目时，一般都比较倾向于购买国外的细胞株，但购买国外细胞株需要考虑的因素有如下几点：

1、细胞株的生物等级，由于有些细胞株及菌株属于管制品，所以从国外购货比较麻烦。

2、在购买国外细胞株时，需交待国外加比较多的干冰(一般在13公斤以上，采用比较密封的泡沫盒加套纸箱。

3、报关时尽量提供比较充足的证明材料，以免担搁时间而导致干冰挥发完细胞株死亡，甚至于被退回给发货人。

4、如果通过国外细胞株在国内的代理商购买的话，合同中需注明以下一些内容：

a.明确的到货时间，这个时间需注明的是工作日，还是普通日。

b.采用什么样的运输方法?

c.如果属于技术外的因素而细胞株无法培养活，供方需负什么样的责任?

d.细胞株的详细资料，以及细胞株的代数，其中，ATCC的细胞株一般都在几十代,这个需要与国外确认，IST-Banca可与他们的代理商联系索取详细资料。

e.需在合同中注明原装进口，避免相关公司鱼龙浑杂，从国外购买回一株细胞株，经过培养传代后，同时供应给几个人；一般国外进口的细胞株都会有原装的冻存管，而且每一支冻存管上都会有批号，而且每次的批号都不一样。

f.在决定购买细胞株之前，必须仔细阅读他们的培养信息，所谓“细胞株未到，培养基先行一步”。

g.在接到细胞株后，最好要求供应公司的人员现场参与，从而用于确认责任。

h.在培养前，请确认您的二氧化碳培养箱二氧化碳浓度的准确性，国外的细胞株建议用进口的细胞培养瓶，比如：orange，corning，falcon品牌的培养瓶。

i.询问你的代理商或者经销商，接到细胞株后是否需要离心置换出DMSO，因为有些细胞厂家建议不要离心，他们会认为离心而导致的碎片比DMSO产生毒性的害处更大，如果可以离心，转速不要过高，一般都在1000转以下，此处需要注意，因为有的公司会拿这一点来拒绝索赔。

j.培养基的服务，仔细与供应商确认培养基的品牌及份量，以免供应商以些理由来推翻你索赔的理由。

k.在细胞株复苏时，一定要先想好步骤再做，一步一步来做，避免导致操作中的污染，复苏是一个非常重要的步骤，往往容易导致污染，然后为污染所导致的杂质而伤透脑筋。

Elisa试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。我司所售elisa试剂盒的种属繁多，大鼠，小鼠，人，豚鼠，鸡，猪类各种elisa试剂盒应有尽有，公司统一规格为48T，96T,人ELISA 试剂盒的操作步骤也不尽相同，以下为具体操作步骤分享：

种属通用操作步骤与elisa试剂盒实验关系
ELISA试剂盒操作步骤（通用）：

1. 加标准品：在酶标包被板上设标准品孔，ELISA试剂盒 依次加入不同浓度的标准品50ul（建议每个浓度做2个平行孔）人ELISA试剂盒。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。大鼠ELISA试剂盒在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl，然后再加样品亲和素10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀人ELISA试剂盒。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟ELISA试剂盒。

4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，大鼠ELISA试剂盒每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干小鼠ELISA试剂盒。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外ELISA试剂盒。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. ELISA试剂盒显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟人ELISA试剂盒.

10. 终止：每孔加终止液50μl，ELISA试剂盒终止反应（此时蓝色立转黄色）。

测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

原创作者：江苏菲亚生物科技有限公司