间接凝集实验原理详细说明

一、原理

可溶性抗原（或抗体）吸附于免疫学反应无关的颗粒（称为载体）表面上，当这些致敏的颗粒与相应的抗体（或抗原）相遇时，就会产生特异性的结合，在电解质参与下，这些颗粒就会发生凝集现象。这种借助于载体的抗原抗体凝集现象就叫做间接凝集反应(Indirect agglutination reaction)。

载体的存在使反应的敏感性得以大大提高。间接凝集反应的优点为：①敏感性强：间接凝集反应是最敏感性的血清学反应方法之一，可以检测到微量的抗体和抗原；②快速：一般1h～2h即可判定结果，若在玻板上进行，则只需几分钟；③特异性强；④使用方便、简单。

二、载体

具有吸附抗原（或抗体）的载体很多，如聚苯乙烯乳胶、白陶土、活性炭、人和多种动物的红血球、某些细菌等。

良好载体有如下几点基本要求：

①在生理盐水或缓冲液无自凝倾向；

②大小均匀；

③比重与介质相似，短时间内不能沉淀；

④无化学或血清学活性；

⑤吸附抗原（或抗体）后，不影响其活性。

目前应用最广的是人的O型红血球和绵羊红血球。而后者应用更广，因为其来源方便。另外绵羊红血球的表面有大量的（约1000个以上）糖蛋白受体，极易吸附某些抗原物质，吸附性能好，且大小均匀一致。

三、间接凝集的分类

1、根据载体的不同，可分为间接炭凝、间接乳胶凝集和间接血凝等。

2、根据吸附物不同可分为间接凝集反应（吸附抗原）和反向间接凝集反应（吸附抗体）。

3、根据反应目的不同，又可分为间接凝集抑制反应和反向间接凝集抑制反应。

4、根据用量和器材的不同又可分为试管法（全量法）、凹窝板法（半微量法）和反应板法（微量法）。

ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法

1、 血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2、 血浆－－－－-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、 细胞上清液－－-1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、 组织匀浆－－－－-将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液

5、 保存－－－－－－如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

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