蛋白质定量——考马斯亮蓝斑点法与紫外分光光度法

该方法特别适用于检测层析柱洗脱组分以定位蛋白洗脱液。例如用于检测亲和层析洗脱液。

1裁剪3MMWhatman滤纸约4mm2。

9每个样本点5ul于Whatman滤纸上。

3自然干燥样本或用电吹风吹干斑点，约lmin或更少。

4将滤纸片浸入0．25％的考马斯亮蓝溶液中（溶于10％甲醇和7％醋酸中）30s。

5将纸片放入10％甲醇和7％醋酸溶液中洗涤3～5min，然后干燥。

二、紫外分光光度法

紫外分光光度法是测定溶液中蛋白质含量的各种方法中最快速、简便的方法。通常在280nm波长下测定样品的吸光值。因其在280nm波长下的最大吸光率主要取决于酪氨酸和色氨酸的存在。205nm波长的吸收也可用。205nm波长下的最大吸光率主要取决于肽链，但与其他氨基酸无关。除了可快速读取结果外，该法的另一个主要的优点是在测定蛋白质浓度时，样品不会遭受损害。

1．纯化蛋白质溶液浓度的测定

（1）在280nm波长下读取与适当对照相比较的吸光值

（2）对于抗体和BSA，可按下述标准计算其浓度，对其他蛋白质可粗约地估计1个单位吸光值相当于lmg／mlo

蛋白质 A280（1mg／m1）

IgG 1．35

1gM 1．2

BSA 0．7

2．含有核苷酸的蛋白质溶液浓度的测定

（1）在280nm和260nm或280nm和205nm波长下读取与适当对照相比较的吸光值。

（2）用下列公式粗略计算其浓度：

蛋白质浓度（mg／m1）=（1．55×A280）—（0．76×A260）

蛋白质浓度（mg／m1）=A205／（27+120A280／A205）

原创作者：江苏菲亚生物科技有限公司