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小鼠细胞色素氧化酶4(COX-4)elisa试剂盒

提供者:上海润裕生物科技有限公司   发布时间:2021/9/23 20:42:21  阅读次数:21次   进入该公司店铺

产品名称:  小鼠细胞色素氧化酶4(COX-4)elisa试剂盒

样本:      适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型; 

代测服务:  免费代测

应用:      酶联免疫分析

检测方法:  双抗夹心法

检测限:    见说明书

供应商:    上海润裕生物

数量:      现货

规格:      96T/48T

可检测动物类型丰富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、鸡、鱼等 

可检测指标齐全:白介素,干扰素,血管紧张素,肺炎衣原体,趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、炎症因子、血管生成素等等指标

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【实验准备】:

1. 小鼠细胞色素氧化酶4(COX-4)elisa试剂盒及待测样本

2. 酶标仪(450nm波长滤光片

3. 高精度移液器,EP管及一次性吸头

4. 37℃恒温箱,双蒸水或去离子水 

5. 吸水纸

 

【标本要求】:

1、血清: 

室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 

2、血浆: 

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。 

3、尿液: 

用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。 

4、细胞培养上清: 

检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。 

5、培养细胞

检测细胞内的成份时,用PBSPH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 

6、组织标本

切割标本后,称取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBSPH7.4),或组织蛋白萃取试剂用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。 

7、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 

8、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 

 

【操作步骤】:

1、标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,依次进行稀释数倍。

2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4、配液:将30倍(48T 20 倍)浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30后弃去,如此重复5次,拍干。

6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 

7、温育:操作同3

8、洗涤:操作同5

10、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

11、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

12、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

【操作事项】:

1小鼠细胞色素氧化酶4(COX-4)elisa试剂盒准备:所有试剂都必须在使用达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。

2、加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,第一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的 “预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。

3、孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

4、洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响后的酶标仪读数。

5、试剂配制:Detection ADetection B在使用请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请精确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。

6、反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

7、底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。

  

【特别说明】:

*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整) 

#: 一周内使用可存于4℃,需长时间存放或多次使用建议存于-20℃,有效期6个月.

 

【上海润裕生物小鼠细胞色素氧化酶4(COX-4)elisa试剂盒免费代测服务说明】: 

1.每个指标需提供100微升样品,如做复孔则200微升 

2.标本离心处理后可通知我们工作人员上门取样(仅限本市),外省可通过泡沫箱加干冰或者冰袋寄送我司。

 

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