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大鼠Ras相关C3肉毒菌毒素底物1(R)elisa试剂盒@产品说明

提供者:上海臻科生物科技有限公司   发布时间:2021/4/2  阅读次数:211次   进入该公司店铺我要询价

 大鼠Ras相关C3肉毒菌毒素底物1(Rac1elisa试剂盒@产品说明

大鼠Ras相关C3肉毒菌毒素底物1(Rac1)elisa试剂盒实验原理

大鼠Ras相关C3肉毒菌毒素底物1(Rac1)elisa试剂盒采用双抗体步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠Ras相关C3肉毒菌毒素底物1(Rac1)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠Ras相关C3肉毒菌毒素底物1(Rac1)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

样本处理及要求

 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

需要而未提供的试剂盒器材

1.酶标仪(450nm

2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

大鼠Ras相关C3肉毒菌毒素底物1(Rac1)elisa试剂盒组成

名称

96孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

12孔×8条

12孔×4条

标准品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

样本稀释液

6mL

3mL

检测抗体-HRP

10mL

5mL

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

终止液

6mL

3mL

封板膜

2张

2张

说明书

1份

1份

自封袋

1个

1个

 

注意事项

1、严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2、洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3、消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

4、底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

5、避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6、在储存和温育时避免强光直接照射。

7、平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8、任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

9、不能使用过期产品。

10、如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。

试剂准备

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

2洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按120稀释,即120×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

操作步骤

1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2、设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3、样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加

4、除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5、弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7、每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。

试剂盒性能

特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15%。

具体指标参数可联系客服详询

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