欢迎来到 阿仪网

免费注册

首页 | 产品 | 求购 | 资讯 | 专题 | 找厂商 | 打听 | 人才 | 品牌 | 资料 | 技术文献 | 展会 | 耗材 | 配件 | 新品 | 促销 | 书籍 | 招标 | 优质仪器
广告

您的位置: 首页 >技术文献 >产品说明 >绵羊丝状支原体抗体(M-MycoplasmalAb)试剂盒(ELISA) 使用说明书

绵羊丝状支原体抗体(M-MycoplasmalAb)试剂盒(ELISA) 使用说明书

提供者:上海科顺生物科技有限公司   发布时间:2020/5/22  阅读次数:19次   进入该公司展台

绵羊丝状支原体抗体(M-MycoplasmalAb)试剂盒ELISA)使用说明书

 

 

 

 

 

本试剂盒用于体外定性检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本绵羊丝状支原体抗体M-MycoplasmalAb)。

有效期:6个月

保存条件:2-8℃

 

 

实验原理

试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验(ELISA)。由于抗体产生量一般比较大,为避免HOOK效应,试剂盒采用两步法。往预先包被绵羊丝状支原体抗体(M-MycoplasmalAb)捕获抗原的包被微孔中,依次加入标本、阴性和阳性对照,经过温育并彻底洗涤,再加入HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的绵羊丝状支原体抗体(M-MycoplasmalAb)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),判定阴阳性。

 

样本处理及要求

1.  血清将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20-80保存,但应避免反复冻融。
2.  血浆EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20-80保存,但应避免反复冻融。
3.  组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mLPBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

4.  细胞培养物上清或其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

 

需要而未提供的试剂和器材

1. 酶标仪(450nm

2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

 

试剂盒组成

 

名称

96孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

96

48

阴性对照

0.3mL

0.3mL

阳性对照

0.3mL

0.3mL

样本稀释液

6mL

3mL

检测抗体-HRP

10mL

5mL

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

终止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

说明书

1

1

自封袋

1

1

 

注意事项

1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

9. 不能使用过期产品。

10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置

 

试剂准备

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

2洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按120稀释,即120×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

 

操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃

2.  设置阴性对照、阳性对照孔和样本孔,阴性、阳新对照孔各加50μL对照品,样本孔待测样本50μL空白孔不加。用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育30min

3.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液350μL,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育30min

5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液350μL,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.  每孔加入底物AB50μL37℃避光孵育15min

7.  每孔加入终止液50μL15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

 

实验结果计算

1. 阴性对照OD值:小于0.2

2. 阳性对照OD值:大于0.8

3、阳性判断(Cut-Off值):阴性对照OD+0.25,样本OD值大于阈值,判定为阳性,反之,为阴性。

优质商品

X射线荧光光谱仪
X射线荧光光谱仪

旗下频道

色谱仪 光谱仪 反应釜 试验箱 试验机 搅拌器 培养箱 离心机 水分测定 气体检测 量热仪 石油仪器 纯水器 比表面仪 温度记录 流量计 万用表 显微镜 粒度仪 测厚仪 硬度计 酸度计 元素分析 生物试剂 电线电缆 天平衡器 传感器 食品检测 压力仪表 电化学 测厚仪 阀门仪表 电力仪表 干燥设备 药物检测