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浙江大学使用Invigentech(英克)公司INVI DNA RNA转染试剂高效率转染质粒DNA siRNA到免疫T(Vδ1 T)细胞

提供者:上海徕创生物科技有限公司   发布时间:2020/5/7  阅读次数:92次   进入该公司展台

 

一、浙江大学附属第二医院乳腺外科;浙江大学附属第二医院浙江省疗法肿瘤微环境与免疫重点实验室;浙江省人民医院,浙江省人民医院,杭州医学院附属人民医院,浙江省个体化医学肿瘤分子诊断与诊断重点实验室;绍兴大学附属医院甲状腺乳腺外科在2020-2-19联合发表标题为Breast cancer-derived exosomes transmit lncRNA SNHG16 to induce CD73+γδ1 Treg cells(乳腺癌衍生的外泌体传递lncRNA SNHG16诱导CD73 +γδ1 Treg细胞)的文章到nature.com/sigtrans,文章已被接受;

二、本研究使用中使用Invigentech(英克)公司INVI DNA RNA 转染试剂转染质粒DNAsiRNAVδ1 T 免疫T细胞里面;

三、本文中转染质粒DNAsiRNA,转染细胞数量信息如下:

A. 将全长2435 bp的序列克隆到pCR3.1载体中构建SNHG16过表达载体;

B. siRNA序列:SNHG16-homo-3495GCCUCUGCUGCUAAUUGUUTT-3'; SNHG16-homo-867 5-CCAAGGAGGGACUGUUUAATT-3′和SNHG16-homo-20045-CCCAGUGUUGACUCACCAATT-3

C. 转染细胞用量:6孔板里面1 × 106 cells/well

四、发表文章部分内容如下:

Breast cancer-derived exosomes transmit lncRNA SNHG16 to induce CD73+γδ1 Treg cells

Plasmid construction and siRNA silencing A full-length 2435 bp sequence was cloned into the pCR3.1 vector to

construct the SNHG16 overexpression vector. The sequences of SNHG16-specifific siRNAs were as follows: SNHG16-homo-349, 5GCCUCUGCUGCUAAUUGUUTT-3; SNHG16-homo-867, 5-CCAAGGAGGGACUGUUUAATT-3 and SNHG16-homo-2004, 5-CCCAGUGUUGACUCACCAATT-3. The miR-165p mimics, inhibitor and negative

controls were purchased from GenePharma (SupplementaryTable S3).

To manipulate the expression of miR-165p in Vδ1 T cells, Vδ1T cells were sorted from peripheral blood and seeded into six-wellplates at 1 × 106 cells/well with 1 ml of medium supplementedwith 10% FBS, 10 μg/ml CD3, 10 μg/ml CD28 and 40 U/mL IL-2.Then, transfection reagent (INVI DNA RNA Transfection Reagent,Invigentech, USA) and miR-165p mimics/NC/inhibitor/inhibitor NC (20 μm) were incubated with the cells for 48 h, after which the cells were collected for further experiments.

 



but not Vδ2+ T cells were revealed to comprise the majority of TILs in all three BC molecular subtypes when gated on CD3 (p < 0.01, Fig. 1b, c). In addition, immunoflfluorescence of frozen sections further confifirmed the dominant distribution of Vδ1+T cells in BC (Fig. 1d). 

To further identify the function of breast cancer-infifiltrating γδ1T cells, BC cell lines (MCF-7, T-47D, MDA-MB-231 and MDA-MB-468) were co-cultured with freshly isolated Vδ1+ T cells frombreast tumour tissue (E:T ratios: 1:1, 5:1 and 10:1). Upon plotting the cell growth curve, the data show that γδ1 T cells did not exert

 

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