产品及特点 人类腺病毒（Adenovirous）是一种可广泛引起呼吸道、胃肠道、泌尿系统
及眼部等身体多个器官疾病的重要病原体，对人类健康危害较大。腺病毒血清型
众多,目前可分为 A-G 7 个亚属，52 个血清型。传统的检测方法包括病毒分离鉴
定、免疫荧光和普通 PCR 等。本试剂盒利用实时荧光定量 PCR 技术开发的腺病
毒检测试剂盒，通过荧光染料实时显示样品模板 DNA 的量，并通过坐标曲线表示
出来，结果直观准确。它具有下列特点：
1. 根据腺病毒 Hexon 基因，设计的针对腺病毒的PCR 引物，克服了其他病毒
的干扰。
2. 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
3. 荧光定量PCR 检测，反应特异性强。
4. 本试剂盒足够 100 次 20uL 体系的 qPCR 反应。
5. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。 规格及成分 成分 编号 十孔盒包装(去纸托
2×qPCR Mix 90408 1.0 mL（A 袋包装）
Hexon 基因专一性引物 A yw1462 1 OD（A 袋包装）
Hexon 基因专一性引物 B yw1463 1 OD（A 袋包装）
超纯水 100935 1 mL×2（A 袋包装）
Hexon 基因阳性对照
(10E9 copy/μL) yw14641465 50 μL（B 袋包装）
使用手册 14-35700sc 1 份
运输及保存 低温运输、-20℃保存(B 袋的阳性对照一定要放扩增区，A 袋的其余试剂放样品
准备区)，有效期一年。 自备试剂 DNA 模板。 使用方法 一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化腺病毒样品的 DNA，也可以另购本公司的柱式病毒 DNAout
或一管式病毒 DNAout，此产品跟本试剂盒兼容。
二、引物的制备（在样品制备室进行）
2. 按引物标签提示在装引物干粉的管中直接加入适量的超纯水（加入量见引物
试管上的标签），使得两条引物的浓度均为 10 uM（10 pmol/uL）。
三、稀释阳性对照（以 10E3-10E8 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度
非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试
剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活
体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的长度为 139bp 的 DNA 片段作为阳性
对照。
3. 标记 5 个离心管，分别为 8，7，6，5，4，3 号。
4. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
5. 在 8 号管中加入 5 μL 10E9 拷贝/μL 的腺病毒 Hexon 基因阳性对照(试剂
盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 10E8拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6. 在 7 号管中加入 5 μL 10E8 拷贝/μL 的腺病毒 Hexon 基因阳性对照(上步
稀释所得)，充分震荡 1分钟，得 10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的腺病毒 Hexon 基因阳性对照(上步
稀释所得)，充分震荡 1分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
8. 换枪头，从 6 号管中取5μL溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得10E5
拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
9. 换枪头，从 5 号管中取5μL溶液到 4 号管中，充分震荡 1 分钟，得10E4
拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
10. 换枪头，从 4 号管中取5μL溶液到 3 号管中，充分震荡 1 分钟，得10E3
拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
三、设置 PCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）
11. 在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次。样
品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有成分
盖上盖子储存好后*后加）：
注:仅 ABI7500、7700 和7900
仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光PCR
仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、
RotorGene 3000、RotorGene 6000 和LightCycler480）不需要使用ROX。
成分 样品 阴性对照 阳性对照（3-8 管）
2×qPCR Mix 10 μL 10 μL 各 10 μL
Hexon 基因专一性引物 A，10 uM 1 μL 1 μL 各 1 μL
Hexon 基因专一性引物 B，10 uM 1 μL 1 μL 各 1 μL
自备 10×ROX (见注) 2 μL 2 μL 各 2 μL
待测样品 DNA 模板 1-5 μL 不加 不加
阳性对照（3-8 号） 不加 不加
各 5μL（3 号样到
3号管，4号样到 4
号管…）
补水到 20 μL 20 μL 20 μL
12. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同
而自行优化）。
13. 数据采集
具体操作按所用仪器的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合
DNA 时，吸收光谱在471 nm，结合DNA 时的吸收光谱在 500 nm，
发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
14. 以 Hexon 基因序列阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标
准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的
Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。 关联产品 即用型荧光定量 PCR 试剂盒（CAT#:90408-1）
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