欢迎来到 阿仪网

免费注册

首页 | 产品 | 求购 | 资讯 | 专题 | 找厂商 | 打听 | 品牌 | 资料 | 技术文献 | 展会 | 新品 | 促销 | 招标 | 优质仪器
广告

巢式PCR实验方法

提供者:上海雅吉生物科技有限公司   发布时间:2019/3/18 8:09:54  阅读次数:1131次   进入该公司店铺

 实验方法原理
由于巢式PCR反应有两次PCR扩增,从而降低了扩增多个靶位点的可能性(因为与两套引物都互补的引物很少)增加了检测的敏感性;又有两对PCR引物与检测模板的配对,增加了检测的可靠性。 由于第二套引物位于轮PCR产物内部,而非目的片断包含两套引物结合位点的可能性极小,因此第二套引物不可能扩增非目的片断。这种巢式PCR扩增确保第二轮PCR产物几乎或者完全没有引物配对特异性不强造成的非特异性扩增的污染。
 
 
巢式PCR反应模式图
实验材料基因样品
试剂、试剂盒PCR缓冲液Tris·HClKClTaq聚合酶
仪器、耗材PCR仪
实验步骤
1.  目标的DNA模板蓝色的对引物结合。对引物也可能结合到其他具有相似结合位点的片段上并扩增多种产物。但只有一种产物是目的片断(图中未显示可能的多种产物)。
 
2.  使用图中红色标记的第二套引物对轮PCR扩增的产物进行第二轮PCR扩增。
 
 
1.  大小:1192 bp
 
2.  初始孵育:94℃4分钟
 
3.  变性:94℃45秒
 
4.  退火:58℃45秒
 
5.  聚合:72℃45秒
 
6.  PCR循环:36
 
第二轮
 
1.  大小:271 bp
 
2.  初始温育:95℃2分钟
 
3.  变性:95℃45秒
 
4.  退火:60℃下45秒
 
5.  聚合:72℃30秒
 
6.  PCR循环:36
收起 
注意事项
1.  引物设计原则:每个特异性引物为24~26个碱基,Tm:64-65%,GC:44-55% 。这样你可以同时做多个不同的TAIL PCR。
 
2.  在轮PCR结束之后,将PCR产物稀释1 000倍(视情况而定)作为第二轮PCR的模板,第二轮PCR的产物同样稀释1 000倍(视情况而定)作为第三轮PCR的模板,这样依次类推。实际操作中可以搞3轮甚至更多,当然做3轮是比较合适了,这个时候PCR的产物已经是高度特异性了。
其他
1.  图解
 

我要索取联系方式

优质商品

X射线荧光光谱仪
X射线荧光光谱仪

版权声明

凡本网注明"来源:阿仪网"的所有作品,版权均属于阿仪网,未经本网授权不得转载、摘编或利 用其它方式使用。已获本网授 权的作品,应在授权范围内使用,并注明"来源:阿仪网"。违者本网将追究相关法律责任。

本信息由注册会员:上海雅吉生物科技有限公司发布并且负责版权等法律责任。

旗下频道

色谱仪 光谱仪 反应釜 试验箱 试验机 搅拌器 培养箱 离心机 水分测定 气体检测 量热仪 石油仪器 纯水器 比表面仪 温度记录 流量计 万用表 显微镜 粒度仪 测厚仪 硬度计 酸度计 元素分析 生物试剂 电线电缆 天平衡器 传感器 食品检测 压力仪表 电化学 测厚仪 阀门仪表 电力仪表 干燥设备 药物检测