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ELISA实验重要步骤详细解析

提供者:上海劲马实验设备有限公司   发布时间:2018/11/23 9:29:23  阅读次数:899次   进入该公司店铺

    科研研究已进入全新时代,爱好生物研究的学者越来越多。不管您是花几百还是上千,甚至上万去购置试剂,这都是zui简单的步。科研实验小帮手之elisa试剂盒,ELISA试剂盒呢,以它灵敏度高和特异性强的特点被科研工作者广泛使用,今天呢,我们就来说说,在ELISA实验中zui重要步骤的详细解析,一起来瞧瞧!
    
    ELISA实验重点步骤详细解析:

    1.标本宜在新鲜时检测,如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应,保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。

    2.冻结标本溶解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混合,不要在混匀器上强烈震荡。

    3.浑浊或有沉淀的标本应先离心或过滤,澄清后再检测。

    4.反复冻融会使蛋白效价降低,所以代测样本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。

    ELISA试剂盒采用双抗体夹心法检测未知抗原:

    1.用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml,在反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜,次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。

    2.加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时,然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。

    3.加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml,37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。

    4.加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。

    5.终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml

    6.结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果,反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。

    劲马专注科研试剂盒的研发及销售多年,涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学的各个领域,满足您实验所需,以实现与客户的双赢,完善的库存及供应体系以及高效稳定的纯化技术,保证产品均能现货供应。期待您的来电。
    

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