检测方法：酶联免疫

检测标本：血清、血浆、尿液、组织匀浆等

本试剂盒仅供科研使用!

试剂盒组成

ANGPTL3 elisa试剂盒需要而未提供的试剂和器材

1.   酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片) 。

2.   洗板机（可调注液量，保证每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。

3.   超净工作台，生物安全柜，通风柜。

4.   高精度单道加液器（量程为0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).

5.   高精度多道加液器（8道或12道，量程为50-300μl).

6.   37℃恒温箱。

7.   低温离心机。

8.   电冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.

9.漩涡混合仪，低频振荡器等

注意事项

1． 从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

3． 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

4． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

5． 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

6. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸，使用时必须注意安全。

7. 各步骤加样均应使用加样器，并经常校准其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。

8. 每次试验测定的同时做标准曲线，。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔浓度的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数（×n）。

9. 配制试剂时，要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂，充分混匀对测试结果尤为重要，使用微量振荡器(使用频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟，例如做圆周动作，使加入孔中的反应液混匀。

10. 实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作，并在使用前充分预热。

11. 手工洗板应注意：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

ANGPTL3 elisa试剂盒样本要求

1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存或根据存放，时间做相应温度调整，但应避免反复冻融，（由于样本种类过多，每个单位处理方式不一样，本说明书不做详细介绍）。

操作程序

1． 标准品的稀释：（本试剂系统提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）按下表格执行：

2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3． 加样:(详细操作流程请联系客服索要说明书）

4． 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释备用。

5． 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6． 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。

7． 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

8． 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。方法是用接种针挑取菌落或培养物气袋为一透明而密闭的塑料袋细胞冷冻管内应有多少细胞浓度

结果判断

1.每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值。（若不减零孔值，标准曲线的零孔应相交于Y轴）

2.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种熟悉应用软件来计算。

3．手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。使用专业制作曲线软件进行分析计算结果。胰蛋白酶在4℃就可能开始降解需培养3-7天直***一个月才能生长

4．若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。