本试剂盒仅供研究使用.检测范围: 96T6.0ng/L – 160ng/L使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆,卵泡液及相关液体样本中列腺素E2 受体-R(PGER)含量.实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人列腺素E2 受体-R(PGER)水平.用纯化的人列腺素E2 受体-R(PGER)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入列腺素E2 受体-R(PGER),再与
样品收集方法:
样品种类繁多，建议使用参考论文中的样本处理方法，以下罗列常规几种样品制备方法，仅供参考。
1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于2000prm转速离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为次性的无内毒素试管。
2. 血浆：抗凝剂使用EDTA钠盐，样品采集后30分钟内于2000prm转速离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01 M，pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(般按1: 9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。后将匀浆液5000prm转速离心5-10分钟，取上清检测。
4. 细胞提取液：贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，2000prm转速离心5分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每1×106个细胞中加入150-200μL PBS重悬，反复冻融使细胞破碎(若含量很低可减少PBS的体积)。将提取液于2000prm转速离心10分钟，取上清检测。
5. 细胞培养上清或其他生物体液：2000prm转速离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
样品注意事项:
1. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按次使用量分装，冻存于-20℃以下，避免反复冻融。 标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
2. 试剂盒检测范围不等同于样本的浓度范围，如果您的样品中检测物浓度高于标准品高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议查阅文献后先做预实验，以确定稀释倍数)。
3. 若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液,由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。
4. 某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。
检测准备工作：
1. 试剂盒及样本从冰箱中取出后应置室温(25-28ºC)平衡120分钟；每次检测后剩余试剂请及时置于4ºC保存。
2. 配制适当量的洗涤液：将洗涤液(20X)用双蒸水或去离子水稀释至1X，例如10ml洗涤液(20X)加190ml水混匀后即为1X的洗涤液。
操作步骤：
1. 计算并确定次实验所需的预包被板条数，取出所需板条放置在96孔框架内，剩余微孔板放回铝箔袋密封，保存于4ºC。
2. 试剂盒和样本在室温下(25-28ºC)平衡120min，充分平衡到室温（注意：试剂盒和样本的平衡，非常重要，定要平衡到足够时间）。
3. 设置标准品孔、样本孔和空白孔。
4. 标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
5. 样本孔先加样本稀释液40μL，再加待测样本10μL；
6. 除空白孔外，标准品孔和样本孔，每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
7. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
8. 标准品孔、样本孔、空白孔，每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
9. 标准品孔、样本孔、空白孔，每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果分析：
1. 复孔的值通常在15%的差异范围内结果才有效，复孔平均值可作为测量值。
2. 每个标准品或样品的吸光度值应减去本底校正孔的吸光度值(如果没有做校正孔，则不需要减去)。
3. 绘制标准曲线。以标准品浓度为横坐标，A450值为纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过样品的吸光度值和标准曲线（直线拟合）计算出样品的相应浓度（工作人员可提供计算软件）。
156. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重新测定，计算浓度时需注意乘以样品的稀释倍数。
关键词：
ELISA试剂盒
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