抗体的保存

很多人，包括自己一开始都不知道具体抗体要如何保存，才能满足后续实验的开展。后来接触多了，也敢说说自己在这方面的一些看法。首先抗体首先一定要看该公司的抗体说明书，如果自己找不到可以找代理抗体的公司（如佰而林生物，卖一下广告）帮忙。这个抗体说明书里已经提到抗体的一些成分，例如santa cruz公司的成分里一般会含有gelatin 、PBS和叠氮化钠。还有就是可以看到他们公司一般的存储要求为4度保存。为了最好地保持抗体的活性，大部分选择的方法是分装。分装可以减少冻融的次数，还可以避免因多次吸取引入污染。所以我们第一次接收抗体的细节显得非常重要。

接到抗体后，先短暂离心一会，把附着在管壁和盖内的溶液离心下来，并分装转移至低蛋白结合的离心管。为什么要低蛋白结合离心管，在后面会说到。现在先谈谈分装的抗体量，这个就要根据我们实际的实验要求。另外还要注意，分装抗体量的下限。一般抗体分装液不低于10uL，因为分装液越少其浓度受到蒸发的影响越大以及吸附到冻存瓶的抗体越多。

大部分情况下，腹水形式的抗体可能含有蛋白酶应该尽可能快的冷冻，自接收日起4度可以保存一到两个星期。需要冷冻进行长期保存。绝对不能冻融的情况是，根据abcam公司的说法是：

A 酶标抗体，绝对不能冻存而应4度保存。冻融会降低酶活力以及影响抗体结合的能力。

B 偶联型抗体，无论是跟荧光素，还是酶、生物素偶联，都应该避光或者锡箔纸包裹保存。见光会降低偶联抗体的活性。特别是荧光抗体，其对光很敏感，实验期间必须全盘避光。

C IgG3的同型抗体，其在复融时很容易形成多聚体，所以必须保存在4度。

原本，叠氮化钠是为了避免微生物的污染，在医院和实验室里都是用作杀生物剂。主要的原理好像是抑制革兰氏阴性菌的细胞色素氧化酶的功能，所以对革兰氏阳性菌没有抑制作用。大家还是先看看wikipedia的原文：

In hospitals ａnd laboratories, it is a biocide; it is especially important in bulk reagents ａnd stock solutions which may otherwise support bacterial growth where the sodium azide acts as a bacteriostatic by inhibiting cytochrome oxidase in gram-negative bacteria; gram-positive （streptococci, pneumococci, lactobacilli） are resistant, a characteristic similar to antibiotic resistance.

像santa cruz,abcam公司的抗体就已经添加了这些保护剂。但是由于叠氮化钠的性质，在以下情况下就不宜添加了：

第一种情况就是，如果抗体是用于染色或者处理活细胞，或者用于体内研究，必须保证所用抗体不含叠氮化钠。抗微生物素试剂对大部分生物体及微生物有毒害作用。

第二种情况就是，叠氮化钠会干预涉及氨基基团的偶联，故在进行氨基基团偶联前必须去掉。在偶联后，抗体可以保存在叠氮化钠，而0.01%的硫柳汞，由于不含伯胺可以作为替换剂。

那么对于第二种情况，就涉及一个去除叠氮化钠的问题了，可以通过透析和胶过滤这两种方法实现。当然所有材料都要无菌，操作过程也要无菌。

然后，就是谈谈冻融的问题了。

反复冻融会使抗体变性，引起形成多聚物，这样就不可避免会影响它结合其它蛋白的能力了。

为了避免这种情况，我们就得做好下面两个方面的工作，所选的冰箱和冷冻保护剂。

-20度保存对于大部分抗体都可行，不过并不是说温度越低保存状态越好。-80度保存就没有客观的优势。所以一般没必要选择-80度保存，这样做反而是一种浪费（节约用电，应该要成为一种好习惯）。冰箱不要选择自动除霜的型号。为了减少结冰，准确来说反复冻融应该要避免。由于同样的原因，抗体应该保存在温度变化最小的冰箱，例如应放在朝向背后而不是朝向门架上。

一些研究者加防冻剂甘油（终浓度为50%）来防止冻融损害，甘油可以降低凝固点到-20度以下。所以经常用santa cruz公司抗体的人，第一次看到sigma、cell signaling的抗体时发现保存温度为-20度，多少会有点吃惊，原来是放了甘油的缘故啊。虽然这样处理对许多抗体而言是可行的，但是只有小部分抗体在这种条件下的稳定性是经过测试，所以最好参考说明书上已经确认的，或者先咨询抗体生产商。-80度已经在甘油的凝固点温度之下，故该温度下不宜用于含甘油抗体的保存。最容易遗忘的一点是，甘油可能会被细菌污染。在添加甘油或者其它任何防冻剂前必须注意将其灭菌处理。

最后，还说说低蛋白吸附离心管和抗体稳定剂的事情了。

由于抗体的量一般比较少，而且抗体吸附到离心管的情形就要考虑了。为了减少抗体的损失，只好选择吸附蛋白量少的材料，以及接收时还要进行离心。一般蛋白在较高浓度（理想浓度为1mg/mL）时不容易发生降解。添加诸如BSA的稳定剂到抗体里是非常合理的。增加的蛋白还可以减少由于粘附管壁而造成抗体损失。对于需要进行偶联的抗体，就不能添加稳定蛋白。因为这些蛋白会跟抗体竞争降低抗体连接效率。

所以每个细节都要做好，实验也就能顺利开展了。我们的目标是，做最充分的准备，做最真实可靠的实验结果。

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