一．关于ELISA简介：

酶联免疫吸附测定是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗原（抗体），再加相应酶标记抗体（抗原），生成抗原（抗体）-待测抗体（抗原）-酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。

二．上海轩泽康生物试剂盒ELISA法的应用：

1.     免疫酶染色各种细胞内成分的定位。

2.     研究抗酶抗体的合成。

3.     显现微量的免疫沉淀反应。

4.     定量检测体液中抗原或抗体成分。

三．上海轩泽康生物大鼠保罗样蛋白激酶-1(PLK1)elisa试剂盒#2022文章已更新实验操作的注意事项：

1.     试剂的准备

按试剂盒说明书的要求准备实验中需要的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。从冰箱取出的实验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需要的部分应及时放回冰箱保存。

2.     标本的采取和保存

可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测以血清标本为主。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、收缩后即可取得。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。

3.  加样

在 ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。如测定需用稀释的血清（如间接法 ELISA），可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保，证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。一般说来，在3天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。大鼠保罗样蛋白激酶-1(PLK1)elisa试剂盒#2022文章已更新

*为了帮助您更好的解决在实验中可能碰到的各种问题，上海轩泽康生物设计了这些问题指导，配以试剂盒内的说明书一起供您参考使用。很多因素都将导致免疫测定实验的失败，而大多数技术失误是可以通过阅读和准确理解说明书以及实验步骤来避免的。若对试剂盒内的说明书由任何意见和建议，欢迎反馈。我们期待听到您的声音，从而完善我们的产品，更好的为您服务。

一．关于ELISA试剂盒常见的问题答疑——

1.     非正常的样本值问题

答：原因一：不正确的收集或保存

解决方案：确保正确的底物体积并混合。如果底物是冻干粉，用相应缓冲液重悬完，全，充分混合并在一定的期限内使用。

        原因二：不正确的样本制备

解决方案：说明书中样本制备方法已经过性能测试验证，严格按照说明书进行样本制备。确保使用正确的校正稀释液。

2.     边缘效应问题

答：原因一：工作台温度不均衡

解决方案：避免再环境条件变化的位置孵育96孔板（如放置在通风处或窗台边）

        原因二：体系液体蒸发

解决方案：保，证移液器正常工作，必要时进行重新校正。保，证移液器吸头连接紧密。使用同一移液器吸取方式。

3.     信号强度增长不充分问题

答：原因一：底物准备有误

解决方案：确保正确的底物体积并混合。如果底物是冻干粉，用相应缓冲液重悬完，全，充分混合并在一定的期限内使用。

       原因二：每孔底物添加体积有误

解决方案：保，证移液器正常工作，必要时进行重新校正。保，证移液器吸头连接紧密。使用同一移液器吸取方式。

      原因三：孵育时间或温度有误

解决方案：严格按照的孵育时间和温度进行实验。严格控制孵育时间，避免过长或过短。

      原因四：仪器设置不正确

解决方案：确保酶标仪使用了正确的滤光片，确保按照说明书，正确的配置仪器参数。大鼠保罗样蛋白激酶-1(PLK1)elisa试剂盒#2022文章已更新