细胞购买

　　通常转染效率与代数相关，建议选择代数低的细胞进行转染。如果质粒中含SV40复制起始点，可以选择293T或293T/17。这些细胞贴壁不牢，特别是温度低于30摄氏度时很容易卷曲脱落，建议使用Cellbind细胞培养瓶培养。

　　293细胞培养特性：

　　1、293细胞明显适应酸性环境,pH值在6.9～7.1时,可顺利贴壁生长,换液时动作要轻。一般用高糖的DMEM培养基。

　　2、传代：倒去废液，PBS洗一次（轻），用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，再让剩下的EDTA/Trypsin作用30s,镜下观察细胞变圆,就可加DMEM终止消化，反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。12小时-24小时90%以上细胞贴壁。293细胞传代时机为达80-90%汇合，传代比例为1：3。

　　3、293细胞在低代时容易贴壁，生长良好，在传到几十代以后，易聚集成团，且贴壁不牢，用PBS冲洗时即可能脱落，即使消化后也不容易吹打成单细胞悬液，购入时先大量冻存。

　　4、复苏：293细胞的另一生长特性是贴壁所需时间长且贴壁不牢。细胞冷冻后复苏时,都有不同程度的肿胀,若以50ml培养瓶待细胞长满瓶底的70%～80%时消化冻存,复苏时将其全部接种至2个50ml瓶中时较为合适。刚复苏的293贴壁很慢，复苏接种后24小时内,应尽量减少观察细胞次数或不作观察,以免因晃动而影响细胞贴壁。复苏后48小时左右观察贴壁情况并进行更换培养基比较合适,如果用一次性塑料培养瓶可增加细胞贴壁牢度。换液宜将培养基预热。

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