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5´-核苷酸检测试剂盒（过碘氧化法）
点击次数：131 发布时间：2022/1/18 14:54:00
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5´-核苷酸检测试剂盒（过碘氧化法）
产品货号：BA1547
产品规格：50T
产品简介：
核酸(nucleic acid)是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，是生命的基本物质之一，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，根据化学组成不同，核酸可分为脱氧核糖核酸(简称DNA)和核糖核酸(简称RNA)。
5´-核苷酸检测试剂盒(过碘氧化法)检测原理是无机磷与钼酸铵形成黄色的磷钼酸铵，随后还原剂把高价钼离子还原成低价钼离子，进而形成蓝色的钼蓝，在一定浓度范围蓝色深浅与磷含量成正比，在660nm处检测吸光度，通过检查标准曲线，获得磷含量。同时为了消除其他无机磷的干扰，测定未经过碘酸氧化的无机磷，予以扣除，即为准确的5´-核苷酸磷。该试剂盒的特点是一测定5´-核苷酸。本试剂盒仅用于科研域，不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成：
| 产品组成 | 50T | 保存条件 |
| 试剂（A）：磷标准（1mg/ml） | 1ml | 4℃ |
| 试剂（B）：样品处理液 | 10ml | 4℃，避光 |
| 试剂（C）：玻璃珠 | 50粒 | 室温，避光 |
| 试剂（D）：H2O2 | 2×1ml | 室温，避光 |
| 临用，按E1：E2：E3=3：1：1配制定磷试剂，即配即用。 | ||
| 试剂（F）：过碘酸试剂 | 3ml | 4℃，避光 |
| 试剂（G）：NA assay buffer | 15ml | 室温，避光 |
操作步骤(仅供参考)：
1. 稀释标准品：取磷标准(1mg/ml)，按磷标准(1mg/ml)：蒸馏水=1：99的比例稀释标准品至10μg/ml。取干净离心管或试管，按下表进行标准品浓度的依次稀释，获得不同浓度的多个磷标准。
| | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
| 磷标准（10μg/ml）/ml | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 | 0.6 | 0.7 | 0.8 | 0.9 | 1.0 |
| 蒸馏水/ml | 0.9 | 0.8 | 0.7 | 0.6 | 0.5 | 0.4 | 0.3 | 0.2 | 0.1 | 0 |
| 磷含量/（μg/ml） | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
2. 制备待测样液：取用粗AMP水解液或RNA水解液，作为待测样液。
3. 磷测定：按下表进行操作，依次加入下列溶液，不能颠倒，每加一种试剂，必须充分混匀。如果样品中有无机磷，应同时检测无机磷，并将无机磷扣除。
| | 空白管 | 标准管 | 氧化管 | 未氧化管 |
| 蒸馏水 | 1.0 | - | 0.5 | 0.5 |
| 系列磷标准（0-10号）/ml | - | 0.5 | - | - |
| 待测样液/ml | - | - | 0.5 | 0.5 |
| 过碘酸试剂/ml | 0.05 | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
| NA assay buffer/ml | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| 混匀，45℃孵育10min | ||||
| NA 显色液/ml | 0.25 | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
| 混匀，孵育 | ||||
| 定磷试剂/ml | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
4. 孵育，以空白管调零，比色杯光径1.0cm，分光光度计测定660nm处吸光度(即为A660)，分别为A氧化、A未氧化。
计算:
以磷含量（μg/ml）为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得标准曲线。氧化管为样液中所有磷的含量，未氧化管为样液未氧化无机磷的含量，二者只差即为样液中5´-核苷酸磷含量。
按下列公式计算样液中5´-核苷酸的含量：
5´-核苷酸含量（mg/ml）=（CM/31）×（N/1000）
5´-核苷酸含量（mg/ml）=（CM/31）×（N/1000）
注意事项：
1. 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。
2. 待测样本如不能及时测定，应置于2~8℃保存，3天内稳定。
3. 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
有效期：6个月有效。
原创作者：上海尚宝生物科技有限公司
