细胞TUNEL测定试剂盒产品说明书

主要用途

细胞TUNEL测定试剂是一种旨在使用标准化的化学方法，包括固着、封阻、通透等完整步骤，从生长在载玻片上的新鲜培养细胞中探寻DNA断点，即运用修饰过的核苷酸，在末端脱氧核糖核酸转移酶（TdT）的帮助下，对DNA单链或双链上断点处的3’末端进行标记，原位探测和定量分析单细胞水平的DNA降解状况的权威而经典的技术方法。该、成功实验证明的。主要适用于各种人体、动物、植物等培养细胞的DNA降解测定。广泛用于细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定。

保存方式

保存封阻液（Reagent C）、酶标液（Reagent E）、染色液（Reagent F）和显色液A（Reagent G）在－20℃冰箱里，严格避免反复冻融，其余的保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent F）和显色液A（Reagent G），避免光照；保证6月

用户自备

小型染色缸：用于载玻片的清洗操作

光学显微镜：用于细胞染色后观察分析

甲基绿复染试剂盒（GMS40010）：用于细胞染色后的复染

特别注意

1． 酶标液（Reagent E）不能在室温下冻融，而必须在冰槽里冻融，冻融后即刻使用；严禁反复冻融；考虑分装，以备下次使用

2． 显色液A（Reagent G）和显色液B（Reagent H）必须在实验操作前即刻混匀；混匀后切忌久放不用或储存后备用；用完扔掉

3． 显色液A（Reagent G）如果出现沉淀，须过滤后再用

4． 每次移取试剂，须更换枪头，以免污染母液，影响结果

实验步骤

一、细胞预处理

1． 准备好待测的生长在载玻片上的培养细胞

2． 小心抽去细胞培养液

3． 小心加上xx微升清理液（Reagent A）在载玻片上，铺满细胞样品表面

4． 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）

5． 小心加上xx微升固着液（Reagent B），铺满整个样品表面

6． 室温下孵育30分钟

7． 小心移去载玻片上的固着液（Reagent B）

8． 室温下，将载玻片置入xx毫升清理液（Reagent A）中，孵育2分钟

9． 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）

10． 小心加上xx微升封阻液（Reagent C），铺满整个样品表面

11． 室温下孵育30分钟

12． 室温下，将载玻片置入xx毫升清理液（Reagent A）中，孵育5分钟

13． 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）

14． 小心加上xx微升通透液（Reagent D），铺满整个样品表面

15． 置于冰槽里，孵育3分钟

16． 室温下，将载玻片置入xx毫升清理液（Reagent A）中，孵育5分钟

17． 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）

二、断点标记处理

1． 小心加上xx微升酶标液（Reagent E），铺满整个载玻片样品表面

2． 在37℃湿润的培养箱里，孵育1小时，保持湿润，避免干燥

3． 小心移去载玻片上的酶标液（Reagent E）

4． 室温下，小心将载玻片置入xx毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟

5． 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）

三、样本染色处理

在染色前，将－20℃冰箱里的试剂盒中显色液A（Reagent G）置入冰槽里融化，然后移取xx微升显色液A（Reagent G）和xx毫升显色液B（Reagent H）到2毫升离心管，充分混匀，标记为显色工作液，置于暗室。然后进行下列操作：

1． 小心加上xx微升染色液（Reagent F）在载玻片上，铺满整个载玻片样品表面

2． 室温下孵育30分钟，避免光照

3． 小心移去载玻片上的染色液（Reagent F）

4． 室温下，小心将载玻片置入xx毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟

5． 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）

6． 小心加上xx微升含有显色液A（Reagent G）和显色液B（Reagent H）的显色工作液，铺满整个载玻片样品表面

7． 室温下孵育10至30分钟，或直至样本出现棕褐色

8． 小心移去载玻片上含有显色液A（Reagent G）和显色液B（Reagent H）的显色工作液

9． 室温下，小心将载玻片置入xx毫升清理液（Reagent A）中浸泡5秒

10． 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）

11． 放上盖玻片或封片

12． （选择步骤）进行甲基绿复染（注意：建议使用甲基绿复染试剂盒－GMS40010）

13． 即刻在一般光学显微镜下观察：阳性细胞呈现棕褐色

注意事项

1． 本产品为10次操作

2． 操作时，须戴手套

3． 封阻液（Reagent C）达到100％封闭效果，超过双氧水封闭效果

4． 本产品为生物素标记，超过荧光素标记强度1000倍

5． 本产品无需POD转换，直接在光学显微镜下观察，既方便，又确保信号不受影响

6． 酶标液（Reagent E）严禁反复冻融

7． 清理液（Reagent A）50毫升置于小型染色缸里，可重复使用

8． 所有操作在室温下进行，除操作中规定之外

9． 每次更换试剂溶液时，保持样品表面基本晾干：可以使用餐巾绵纸吸干或枪头抽掉

10． 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面

11． 细胞染色完成后，即刻进行光学显微镜观察

12． 本公司提供系列细胞凋亡试剂产品

原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司