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细胞核的分离的原理
点击次数：3443 发布时间：2017/10/19 10:44:59
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刘**
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细胞核的分离 细胞核作为一个功能单位，完整地保存遗传物质，并指导RNA合成，进而表达出相应的蛋白，在一定程度上细胞核控制着细胞的代谢、生长、分化和繁殖活动。因此细胞核的分离是研究基因表达及细胞核形态结构的首要步骤。不同组织来源的细胞经匀浆后，可用分级离心等方法将细胞核进行分离纯化。
细胞核的分离目前较常采用以蔗糖为介质的差速离心法，可分为细胞核分离和纯化两大步骤。细胞匀浆后，先以0. 25mol／L。的蔗糖1000g离心洗涤，然后在0. 34mol／L和0．88mol／L的蔗糖梯度中1500g离心15～20分钟，沉淀即为纯化的细胞核。现在细胞核的提取试剂已商业化生产，公司试剂盒中会提供详细的操作步骤。细胞核被分离后，可经甲苯胺蓝染色在光学显微镜下观察，或直接在电子显微镜下观察核内染色质的分布情况。
此外，在细胞增殖的研究中，人们常常将Brdu／Edu等底物掺入到增殖的细胞核DNA链中，再通过荧光素标记Brdu/Edu，继而显色增殖细胞的细胞核。在细胞凋亡研究中，人们常采用TUNEL染色标记凋亡细胞的细胞核。
由于三维重建等优点，共聚焦显微镜在细胞成像技术中的地位逐渐突出。：DAPI虽然常用，但是多数共聚焦显微镜没有紫外线波段的激发光，所以其他一系列更适用于共聚焦的核酸荧光染料被开发出来，比如TOTO系列，TO-PRO系列，SYTOX系列以及SYTO系列等。
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