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仓鼠卵巢细胞,二氢叶酸还原酶缺陷

点击次数:232发布时间:2016/10/30

仓鼠卵巢细胞,二氢叶酸还原酶缺陷

更新日期:2016/10/30 15:19:53

生 产 地:中国大陆

产品型号:CHO/dhFr-

简单介绍:IMDM+10%FBS+1%PS+0.1mM次黄嘌呤+0.016mM胸腺嘧啶+100nM氨甲喋呤

相关标签:细胞株 

详细内容

原代
收到细胞后,请对细胞培养瓶外表进行消毒,将细胞置于培养箱中进行1-2小时的缓冲,待细胞恢复基本生长状态后,进行后续细胞实验。
在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况:
(一)细胞未长至85%时,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸去剩余培养液,只留6-8ml 培养液继续培养。
(二)细胞已长满(达 85-95%)。即可进行传代,具体步骤如下:
1.弃去培养液,用PBS洗涤1-2次,
2.加入1.0ml胰酶消化液,显微镜下观察细胞消化情况,若细胞回缩变圆、透亮、轻拍甁壁呈流沙样脱落,则迅速拿回操作台,加入等量或双倍的含10%血清的完全培养液,终止消化并轻轻吹打细胞,使其变成单细胞悬液,
3.将细胞收集于离心管中离心1000rmp/5min,弃上清,轻弹管底,将细胞弹散,
4.加入新鲜培养液重悬细胞,进行传代、冻存,
5.如果没有特别说明,建议收到细胞后的次传代比例为1:2。
注:1.观察细胞密度用(4X物镜)低倍镜观察,以便正确的判断细胞密度;观察细胞形态请用(10X或20X)高倍镜观察;
2.瓶中运输的培养液不能重复使用,请换新鲜培养液培养;
3.有些细胞贴壁不牢,如发现贴壁细胞有脱落,可离心吹打后接种到新瓶内;
4.收到细胞后,若发现培养瓶破损、漏液及细胞污染,请及时与我们联系。
保存
冻存条件:70%基础培养液+20%胎牛血清+10%DMSO
保存条件:液氮存储
常见问题及解决方案
1.培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。
2.细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留8-10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决

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