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鸡马立克病毒(MDV)试剂盒(荧光-PCR法)
点击次数:29发布时间:2023/10/4
更新日期:2023/10/4 18:56:07
生 产 地:
产品型号:
详细内容
沪峥PCR优势:
1. 特异性:所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析,经过GenBank及自建庞大数据库的比对,确保
所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段,可实现对细菌种属及血清型的特异检测。
2. 重现性:该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证。
3. 灵敏性:该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测,当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时,可实现对其的直接检测,无需繁琐的增菌过程。
4. 实用性:检测范围广,涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌,可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测,整个检测过程为3-4个小时。
鸡滑液囊支原体(MS)试剂盒(荧光-PCR法)产品名称】
通用名称:鸡马立克病毒(MDV)试剂盒(荧光-PCR法)
Name :MDV Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
鸡马立克病毒(MDV)试剂盒(荧光-PCR法)引起鸡滑液囊炎,该病是鸡的一种急性或慢性传染病,以侵害关节的滑液囊膜及腱鞘为主,引起关节渗出性滑膜炎、腱鞘炎及跗关节和脚垫肿胀[1],此外还会造成生长发育迟缓、胴体降级、产蛋下降等,并且还与呼吸道疾病相关,给养鸡业造成巨大经济损失[2]。
本试剂盒适用于检测鼻腔、气囊组织、鼻腔、食管、气管、关节渗出物等样本中的鸡滑液囊支原体,用于鸡滑液囊支原体感染的辅助诊断。
【检验原理】
本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术,设计一对鸡马立克病毒(MDV)特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对鸡马立克病毒(MDV)核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
鸡马立克病毒(MDV)试剂盒(荧光-PCR法)【试剂组成】
名 称 | 规 格 |
酶液 | 50μL×1管 |
MDV反应液 | 500μL×2管 |
MDV阳性质控品 | 50μL ×1管 |
阴性质控品 | 250μL ×1管 |
1)不同批号试剂不能混用。
2)试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次,有效期12个月。
适用仪器】
ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。
标本采集】
病死或扑杀禽,从鼻腔、气管或气囊、关节渗出物;活禽取鼻腔、食管、气管拭子、注射器穿刺吸取关节液
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过6个月,标本运送应采用2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。
鸡马立克病毒(MDV)试剂盒(荧光-PCR法)【使用方法】
样本前处理
组织样品:每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中;液体样品,直接取100μL提取
DNA提取
- DNA的提取也可以采用(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。
试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照;样品每满7份,多配制1份),每测试反应体系配制如下表:
试剂 | MDV反应液 | 酶液 |
用量(样本数为N) | 20μL | 1μL |
加样(样本处理区)
将步骤1提取的DNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。
PCR扩增(核酸扩增区)
- 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内;
- 设置好通道、样品信息,反应体系设置为25μL;
荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光,选择None即可。
- 循环参数设置:
步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
结果分析判定
设置Baseline和Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节),以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。
结果判断
阳性:检测通道Ct值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;
可疑:检测通道35<Ct值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为35<Ct值≤38,且曲线有明显的增长曲线,判定为阳性,否则为阴性;
阴性:样本检测结果Ct值>38或无Ct值。
质控标准
阴性质控品:Ct>38或无Ct值显示;
阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct值≤32;
以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
检测方法的局限性
- 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
- 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
- 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
- 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
- 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
- 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
- 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
- 所有操作严格按照说明书进行;
- 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,*混匀并短暂离心;
- 反应液应避光保存;
- 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
- 使用一次性吸头、一次性手套和各区工作服;
- 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
- 实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
- 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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