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PCR回收及连接
点击次数：576 发布时间：2015/11/10 10:04:18
商家名片
吴**
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按照“PCR产物回收”中的步骤回收酶切后的PCR产物以及酶切、去磷酸化的载体，琼脂糖电泳检测，根据其亮度及片段大小估算摩尔浓度。
1．连接前先电泳确定待连接载体与片段的浓度，载体与片段的摩尔比为1∶3-5。
2．在离心管中加入如下成分：
10×连接Buffer 1μl
待连接的样品PCR产物+载体 8.5μl
NEB T4连接酶 0.5μl
如果连接粘性末端，16度连接2h至过夜，如果连接平性末端，最好16度连接6h以上（具体连接时间可根据具体实验进行调整）。
3．可以同时设立不加插入片段的对照，以测定假阳性背景（选做）。
4．转化之前无须将连接酶灭活，可取5μl连接产物直接转化，余下的-20度保存。
原创作者：武汉博欧特生物科技有限公司
