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甲醛琼脂糖凝胶上RNA电泳实验步骤
点击次数：313 发布时间：2016/3/8 8:36:21
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甲醛琼脂糖凝胶上RNA电泳实验步骤，一、材料
1. 缓冲液与溶液
溴化乙锭（200 μg/ml）
甲醛
甲酰胺
10X 甲醛凝胶电泳加样缓冲液
10X MOPS 电泳缓冲液
2. 凝胶
含有 2.2 mol/L 甲醛的琼脂搪凝胶
3. 核酸和寡核苷酸
RNA 样品
RNA 大小参照物
4. 专用设备
水平电泳仪
透明直尺
55℃ 水浴
甲醛琼脂糖凝胶上RNA电泳实验步骤，二、方法
1. 在一灭菌的微量离心管建立变性反应
RNA（多达 20 μg） 2.0 μl
10X MOPS 电泳缓冲液 2.0 μl
甲醛 4.0 μl
甲酰胺 10.0 μl
溴化乙锭（200 μg/ml） 1.0 μl
2. 盖紧微量离心管的盖子，于 55℃ 温育 RNA 液体 60 min，在冰水中冷却样品 10 min，然后离心 5s 并将所有的液体在微量离心管的底部沉淀。
3. 加 2 μl 10X 甲醛凝胶加样缓冲液并将试管重新置于冰上。
4. 将琼脂糖/甲醛凝胶装入水平电泳槽中，加入足够 1X MOPS 电泳缓冲液覆盖凝胶约 1 mm。电泳 5 min （ 5 V/cm）。加 RNA 样品到凝胶加样孔中，将空胶两侧的两条最外侧的泳道留下，加样 RNA 标准大小参照物。
5. 凝胶浸入 1X MOPS 电泳缓冲液中，4~5 V/cm 电压下进行电泳，直到溴酚蓝移出约 8 cm （ 4~5 h）。电泳时用较高电压会导致条带模糊不清。因为电泳缓冲液的 pH 值在电泳过程中会发生变化，装好电泳槽，缓冲液通过蠕动泵不断从一个室到另一个室。每隔一个小时更换一次缓冲液。
6. 将凝胶放置于一片 Saran 膜上在紫外线透射仪上观察 RNA 将染色凝胶和紫外线透射的照片用透明的直尺对比。
7. 照像并测量照片上每个 RNA 条带至加样孔的距离，以 RNA 片段大小的对数值对 RNA 条带的适移距离作图，用所得曲线计算从凝胶转移到固相支持体后通过杂交计算出 RNA 分子的大小。
8. 通过上或下毛细管转移固相化的 RNA 到固相支持物上。甲醛琼脂糖凝胶上RNA电泳实验步骤
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
