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上海沪鼎分享两种方法使细胞适应无血清培养基
点击次数：680 发布时间：2015/9/23 10:06:53
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钱**
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1.直接适应——细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基（sfm）中。一些类型细胞可直接从包含血清的培养基适应无血清培养基。对于直接适应，接种细胞密度应该:2.5×105~3.5×105细胞/ml。当细胞密度达到1×106~3×106细胞/ml时，传代培养细胞。当细胞密度在培养4到7天后达到2×106~4×106细胞/ml时，细胞完全适应了无血清培养基。每隔3~5天，当细胞密度达到1×106~3×106细胞/ml，细胞活率在90％时，贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。
2.连续适应——分好几步把细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基（sfm）中，与直接适应相比较，连续适应趋向对于细胞更加温和一些。
（1）以2倍正常接种密度接种生长活跃的细胞培养物到75%有血清培养基：25％sfm 混合培养基中，传代培养。
（2）当细胞密度>5×105细胞/ml时，以2×105到3×105细胞/ml细胞密度，在有血清培养基：sfm为50∶50的混合培养基中传代培养。
（3）以2×106到3×106细胞/ml细胞密度，25％有血清培养基和75% sfm中传代培养。
（4）当细胞密度达到1×106到3×106细胞/ml（接种后4到6天），在100％sfm培养基中传代培养。
（5）每隔3到5天，当细胞密度达到1×106到3×106细胞/ml，细胞活率在90％时，贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。
建议备份前一次混合培养的培养物，直到每一次细胞适应了新的混合培养基。每一次减少血清前，可能需要在sfm/有血清混合培养基中进行几次传代。
在适应过程中，最好不要让细胞生长过度。这将增加选择亚群的可能性。需要注意，与有血清培养基相比，大部分sfm包含非常少的蛋白质，因而更易于受外界因素的影响。
原创作者：上海沪鼎生物科技有限公司
