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流式细胞核型分析
点击次数：439 发布时间：2016/8/1 8:35:16
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流式细胞核型分析
用流式细胞术可将分离的染色体分类、纯化，传统的核型分析在取材、培养、涂片、固定后，用分带技术显示出不同染色体的特征信息，然后再显微照相，放大、剪接、组型。这是一个十分费时且不可避免掺有主观因素的技术。目前，用仪器自动分型的方法，一是采用图象技术的静态方法，再有就是采用流式细胞术。后者除了可做染色体分析外还可纯化，得到克隆实验所要求的染色体，这是其他任何技术都无法完成的，为此专门设计了专门的特种流式细胞计。
染色体分析或分选所用的仪器要求有较高的分辨率，CV值至少要达到2%，稳定性也要求较高，特别是在做分选、纯化时，一般商品多数难以达到长时间分选的要求。当然、实验结果的好坏还与被分析或分选的各号染色体DNA之间的含量差异大小及分布有关。图是用商品仪器FSCS III、PI染色，中国仓鼠卵巢细胞
CHO-K1的核型分析。图中横坐标代表相对DNA含量，纵坐标代表染色体的相对数目。图中共有10个峰，对应各号染色体。同号染色体的丰度对应为该号染色体峰下的面积。由于测量时仪器分辨率不高，CV仅为3%，故X染色体信号被DNA含量接近的染色体信号所掩盖，观察不到。但由此图我们可以看到，用商
CHO-K1的核型分析。图中横坐标代表相对DNA含量，纵坐标代表染色体的相对数目。图中共有10个峰，对应各号染色体。同号染色体的丰度对应为该号染色体峰下的面积。由于测量时仪器分辨率不高，CV仅为3%，故X染色体信号被DNA含量接近的染色体信号所掩盖，观察不到。但由此图我们可以看到，用商品仪器对染色体数目不太多的细胞作核型分析还是可能的。对人的染色体来说，由于数目较大，做起来就会有较多的困难，特别是某些染色体间DNA含量十分接近，如9—12号之间，19号与21、22号之间、7号与X之间，因为太接近了，即使仪器CV<1%，仍然无法分开，为解决这一困难，发展了双激光束流式细胞计。
双激光束的波长一个是紫外激光，用以激发Hoechst 33258；另外一个氩离子激光器波长调到4580nm用以激发色霉素A3。染色体被同时用上述两种染料染色，由于Hoechst 33258和AT丰富的DNA结合，色霉素A3和CG丰富的DNA结合，利用两种染料对DNA不同碱基组成有不同的结合优势这一差异，就能使上述不易分开的染色体较好地区别开，这样一个二维图如图。
在此图上，除9—12号染色体外，其他染色体都已区分得很清楚，这大概是目前用流式细胞计作核型分析所达到的极限。
流式核型分析成功与否和样品制备有很大的关系。样品制备中的关键是染色体分离，染色体分离大体上有3种方法：1、用乙烯甘油稳定缓冲液，此法显著的优点是分选后的染色体可用分带法进行细胞遗传学鉴定，但此法产生碎片较多，且有些样品染色体的DNA被降解；2、利用MgSO4稳定染色体；3、利用多胺稳定染色体。后两种方法适用于多种细胞系，所的染色体样品纯度较高，染色体在4℃下保存几个月形态都很稳定，主要缺点是分选后的染色体不易用分带法进行细胞遗传学分析。
流式核型分析成功与否和样品制备有很大的关系。样品制备中的关键是染色体分离，染色体分离大体上有3种方法：1、用乙烯甘油稳定缓冲液，此法显著的优点是分选后的染色体可用分带法进行细胞遗传学鉴定，但此法产生碎片较多，且有些样品染色体的DNA被降解；2、利用MgSO4稳定染色体；3、利用多胺稳定染色体。后两种方法适用于多种细胞系，所的染色体样品纯度较高，染色体在4℃下保存几个月形态都很稳定，主要缺点是分选后的染色体不易用分带法进行细胞遗传学分析。 在仪器原理部分，我们介绍过缝扫描流式细胞计，该种仪器亦曾被用来研究染色体，但由于仪器本身有一些限制，且其方法似乎不如图象分析技术完备，1985年以后发表的文章极少，这或可说明其应用较为有限，发展也十分缓慢。
原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司
