月饼类糕点中黄曲霉毒素B1的检测方法

黄曲霉毒素是一种肝脏毒素，对人和许多动物都有*的致癌性，其中黄曲霉毒素B1毒性zui大，致癌性zui强。因此，食品中黄曲霉毒素B1的检测是非常重要的。下面介绍的分离及测定黄曲霉毒素的方法——固相酶联免疫法是常规分析中常用的一种重要方法。

一、 原理

CSY-E96H黄曲霉毒素快速检测仪 （快速检测仪|检测仪|黄曲霉毒素测试仪）采用固相酶联免疫吸附ELISA的原理,即酶联免疫法；可定量检测粮食、食品、饲料、油脂、乳制品、药物、饮料、牛奶、酒等产品中的黄曲霉毒素(B1，B2，G1，G2 M1 M2 AFM1、AFP1、AFQ1、AFB1-2，3-环氧化物）含量。

快速检测实验操作所需的试剂及材料：微孔板 包被有AFB1-BSA；5个浓度的AFB1标准溶液各(1mL)可直接使用；标准1：0ng/mL 可直接使用；标准

2：1.0ng/mL可直接使用；标准

3：2.0ng/mL 可直接使用；标准

4：5.0ng/mL可直接使用；标准

5：10.0ng/mL 可直接使用；AFS单克隆抗体溶液(6mL)可直接使用；酶标物(12mL)可直接使用；显色液(12mL)；终止液(6mL)；浓缩洗液(30mL) ；空白对照(6ml)微孔板酶标仪(含450nm)：定量分析用；振荡器，粉碎机，微量移液器，量筒，漏斗和容量瓶，快速定性滤纸；试剂：氯化钠(分析纯)、甲醇(分析纯)、去离子水或蒸馏水

检验操作注意事项：标准溶液中含有黄曲霉毒素，应特别小心。使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液用pH7的次氯酸溶液(10%v/v)浸泡。终止液为0.5N硫酸，避免接触皮肤。不要交换使用不同批号盒中的试剂。

黄曲霉毒素B1检验实验样品前处理：样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存，取5g粉碎的有代表性的样品，加1.25g氯化钠及25mL70% 甲醇-水，强力振荡3分钟；用快速定性滤纸过滤；取1mL滤液，用1%氯化钠溶液稀释10倍；取50μL稀释液进行分析；据需要可以增加样品量，但甲醇溶液的量也应相应增加。

检验实验注意事项和测定程序：每次加样后立即将所有试剂放回2-8 ℃，每步操作时间控制在5min内， 孵育过程中应避光。测定程序1. 取所需数量的板条插入微孔架，记录样品及标准的位置。

2. 加入50mL标准品或处理好的样品到微孔，每个标准和样品必须使用新的吸头。

3. 将50mL黄曲霉毒素B1单克隆抗体使用液加入到每个微孔(注意移液器管尖不要接触到放进孔中的液体，避免交叉污染)，在适当位置孔加空白对照液100mL，37℃孵育90min。4. 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板3min×3次，zui后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液体。

5. 每孔加入酶标物100mL，37℃孵育60min。

6. 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板3min×3次，zui后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液体。

7. 每孔加入显色液100mL(2滴)，37℃孵育10 min -12min

8. 每孔加入终止液50mL(1滴)，立即用酶标仪在波长为450nm处测定吸光度值(OD值)。

原创作者：深圳市芬析仪器制造有限公司